[發明專利]一種膠原蛋白多肽粉的制備方法及其在免疫學中的應用

在審

• 申請號: 201810146920.2
• 申請日: 2018-02-12
• 公開（公告）號: CN108490185A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 葉一;李歡;倪曉濤;王佩瑞;陸亮;操鳳文;肖琨;李秋萍;楊茜茹;朱軒儀
• 申請（專利權）人: 上海艾瑞德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64;C07K14/78;C12P21/06;C07K1/14
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

本發明提供一種膠原蛋白多肽粉的制備方法，具體地，所述制備方法包括：除雜得到目標漿狀物、蛋白酶水解、對酶解液進行鹽析、離心后提取上清液、上清液透析純化，干燥后得到膠原蛋白多肽粉、免疫反應測試。本發明適合大規模生產，且原料來源廣，價格低廉，制備得到的膠原蛋白多肽粉具有免疫檢測準確度高的特點。

技術領域

本發明涉及一種膠原蛋白多肽粉，具體地，涉及一種應用于免疫檢測領域的豬皮膠原蛋白制備的膠原蛋白多肽粉。

背景技術

人們利用免疫學技術對藥物、激素、蛋白、傳染物進行快速精確地檢測。在所有的免疫學方法中，被分析物和分析物之間都會有特異性的反應或者結合。這種特異性的反應大多指的是抗原作為被分析物，抗體或抗體片段作為分析物之間結合形成特異性結合配對，同一反應中，可能會有多個抗體或抗原互相反應。檢測抗體抗原反應的方法有很多，一般是對抗體或者抗原進行標記，常用的標記技術有放射性同位素標記、色素標記、熒光素標記、酶標記或者特異性結合配體標記(生物素/鏈霉親和素)。在非均相免疫檢測中，分析物或者被分析物是被固定在固相載體上的。

在免疫檢測中存在的主要問題是被檢測樣本中或者固相載體上的附屬物質與被分析物或分析物發生了非特異性反應，引起背景信號升高，信號結果離散等現象，從而降低了檢測結果的靈敏度和特異性。由于被測物的非特異性結合或樣本中的其他物質的特異性結合，會引起的檢測信號出現假陽性或假陰性，使得免疫結果出現較大的偏差，這可能會誤導臨床醫生做出錯誤的治療方案，耽誤治療時間，造成不可逆轉的后果。尤其是ICU、急診常用項目檢測結果的準確性可能會直接影響搶救方案，威脅患者生命。因此，如何消除免疫檢測中非特異性反應，確保結果的準確可靠，始終是免疫學檢測中的難點。

之前的研究結果顯示，各種蛋白、改性蛋白分子、蛋白聚合物能夠降低在免疫反應中的非特異性結合。然而，可溶性蛋白粘度高且不穩定，加熱至40℃后降至室溫會使其變性成凝膠狀；天然的蛋白的部分成分可能會對免疫檢測過程產生負面的影響；化學改性的蛋白分子，尤其是酰化蛋白質被認為能夠減少免疫檢測中的非特異性結合，但是無法消除血漿中其他抗體所引起的假陽信號；也有研究利用聚合免疫球蛋白來降低類風濕因子的干擾，但在免疫檢測中引入這種人免疫球蛋白多為抗體或抗體聚合物會引起背景信號提升，同時生產這種免疫球蛋白成本高工序復雜。

綜上，本領域迫切需要開發一種兼具來源廣泛、價格低廉、免疫檢測準確度高等功能的膠原蛋白多肽粉。

發明內容

本發明的目的是開發一種兼具兼具來源廣泛、價格低廉、免疫檢測準確度高等功能的膠原蛋白多肽粉。

本發明的第一方面，提供了一種膠原蛋白多肽粉的制備方法，具體地，所述的方法包括步驟：

(a)提供一含有膠原蛋白多肽的組織作為原料；

(b)將所述含膠原蛋白多肽的組織進行切碎處理，從而形成小塊狀組織，其中所述小塊狀組織的大小為1-5mm³；

(c)對所述小塊狀組織進行漿化處理，形成漿狀物；

(d)對所述漿狀物進行去雜處理，從而獲得經去雜的漿狀物；

(e)對所述經去雜的漿狀物進行酶解處理，從而獲得酶解液；

(f)任選地對所述酶解液進行滅活處理，從而獲得經滅活的酶解液；

(g)對所述經滅活的酶解液進行鹽析處理，從而獲得含膠原蛋白多肽的上清液；

(h)對所述上清液進行透析處理，從而獲得經透析的上清液，其中所述透析處理采用截留分子量為3-7kDa的透析膜；

(j)對經透析的上清液進行干燥，從而獲得所述的膠原蛋白多肽粉。

在另一優選例中，所述的組織選自皮膚、肌腱、角膜或其組合。