[發明專利]一種負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810145959.2
• 申請日: 2018-02-12
• 公開（公告）號: CN108295049B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 容敏智;金靜維;章明秋
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/36;A61K39/39
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

1.一種負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子，其特征在于，所述納米粒子包括以下重量份數的原料組成：

水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖 3.5～5.5份；

離子交聯劑 0.06～1.19份；

抗原蛋白 0.3～0.7份；

其中，所述離子交聯劑為低分子量陰離子交聯劑；

所述離子交聯劑為三聚磷酸鈉或CpG-OND寡核苷酸；

所述抗原蛋白為雞卵清白蛋白；

所述納米粒子的制備方法包括以下步驟：

S11：用甲酸純化β-1,3-D-葡聚糖；

S12：將純化的β-1,3-D-葡聚糖溶于溶劑，再加入N'N-羰基二咪唑，在氮氣保護下室溫反應1.5h，反應結束后析出、洗滌、干燥；其中，N'N-羰基二咪唑和β-1,3-D-葡聚糖的質量比為0.167～0.5︰0.162～0.486；

S13：將步驟S1-2得到的干燥樣品溶于溶劑，再與少量的三乙胺混合，將得到的混合液滴加到過量的乙二胺溶液中，滴加時間不少于1.5h，滴加完畢室溫繼續反應5h，隨后析出、洗滌，用1kDa分子量透析袋透析3天后將透析袋中的保留液冷凍干燥，得到水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖；

S21：將水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖加水配成濃度為0.7～1.1mg/mL，pH值為6～7的溶液；

S22：分別配置離子交聯劑水溶液和抗原蛋白水溶液，濃度分別為0.1～2.38mg/mL和0.6～1.4mg/mL；

S23：將離子交聯劑水溶液和抗原蛋白水溶液等體積混勻，將其逐滴滴加到水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖溶液中并混勻，即可獲得負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子；

步驟S22中所述離子交聯劑的水溶液為三聚磷酸鈉水溶液，濃度 為0.8～1.8mg/mL或者CpG-OND寡核苷酸水溶液，濃度為0.1～2.38mg/mL。

2.根據權利要求1所述負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子，其特征在于，所述納米粒子包括以下重量份數的原料組成：

水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖 3.5～5.5份；

三聚磷酸鈉 0.4～0.9份；

抗原蛋白 0.3～0.7份。

3.根據權利要求1所述負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子，其特征在于，所述納米粒子包括以下重量份數的原料組成：

水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖 3.5～5.5份；

CpG-OND寡核苷酸 0.06～1.19份；

抗原蛋白 0.3～0.7份。

4.權利要求1～3任一所述負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子在制備納米顆粒疫苗中的應用。

5.一種納米顆粒疫苗，其特征在于，包含有權利要求1～3任一所述負載抗原的水溶性胺化β-1,3-D-葡聚糖納米粒子。