[發明專利]在體外偵測樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法

有效

• 申請號: 201810144554.7
• 申請日: 2018-02-01
• 公開（公告）號: CN108374038B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 李利;胡家銘;郭廣柱
• 申請（專利權）人: 鑒識生物系統有限公司
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827;C12Q1/6837;C12Q1/6886
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 賀淑東

本發明公開了一種在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法。特別是涉及在體外使用一搭載包裹具有堿基突出區段的分子信目標脂質復合體納米粒的生物芯片偵測生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法。其次，本發明所提供的方法對于單點變異的基因分子具有非常好的辨識專一性和信號靈敏度，可以廣泛應用在檢測判斷早期病變的生物樣本。

技術領域

本發明涉及一種在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法，更具體涉及利用一種具有堿基突出區段的分子信標應用在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸，特別是偵測單點變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸。

背景技術

傳統的生物分子芯片和連鎖聚合酶反應法等分析技術通常缺乏辨識生物樣本中僅具有微小結構變化差異的生物信息分子的特性，對于檢測判斷生物樣本是否是早期病變的生物樣本常產生假陰性的問題，而無法提供正確可信賴的檢測結果。

其次，各種生物樣本中的mRNA和microRNA雖然可以通過qRT-PCR、微陣列和RNA測序技術來實現定量測定。通過收集生物樣本中所有細胞分泌的外泌體來定量其中的目標RNA，然而癌細胞樣本分泌的外泌體只占所有外泌體的一小部分，所以其檢測靈敏度不高。更無法有效地用來檢測變異的基因，信息核醣核酸或是微核醣核酸等RNA分子，另外，這些方法需要繁瑣的樣品制備和檢測步驟，價格昂貴

美國專利公開號US 20140094383公開了一種生物芯片，然而該生物芯片并沒有解決能偵測分析變異的基因分子的問題，因而限制了其使用的領域。

基于前述的原因，涉及變異的基因分子的檢測應用領域亟需新的檢測方法和相關的芯片設計以克服解決先前技術所遭遇的困難和問題，因此，本發明的技術方案是為了突破先前技術的限制所做的新穎設計。

發明內容

基于以上的背景技術說明，本發明的第一目的在于提供一種在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸(mRNAs)或微核醣核酸(microRNAs)的方法。所述的方法特別是在體外使用具有堿基突出區段(overhang section)設計的分子信標(molecularbeacons)偵測生物樣本中所含有的單點變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸等基因分子，上述的具有堿基突出區段的分子信標(Oh-MBs)是新穎結構設計的人工合成的寡核酸(polynucleotide)，其對于生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸具有優異的辨識專一性和靈敏性，因此，本發明所述的方法能廣泛應用在體外進行各種生物樣本中所含有的變異的基因、信息核醣核酸(mRNAs)或微核醣核酸(microRNAs)的偵測。

上述第一目的是通過以下的技術方案來實現的。

于代表技術方案，所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法，其特征在于該方法包括下述步驟。

提供生物樣本，該生物樣本中含有細胞、腫瘤循環細胞(CTCs)和外泌體(EVs)；和使用裝配具有堿基突出區段的分子信標(Oh-MBs)的分析器在體外測量上述的生物樣本和該具有堿基突出區段的分子信標進行交互作用所產生的熒光信號，借此偵測存在于上述生物樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸，其中上述的具有堿基突出區段的分子信標是人工合成的寡核酸(polynucleotide)，該寡核酸是由至少包含9個堿基對的骨干區(stem)、至少包含4個堿基的回路(loop)、至少包含5個互補堿基的堿基突出區段，該互補堿基是互補于上述的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸、熒光分子基團和熒光淬滅基團所構成，其中上述的堿基突出區段的最后一個互補堿基或上述骨干區的第一個堿基是對應于上述的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的單點變異的堿基。