[發明專利]在體外偵測樣本中的變異的基因、信息核醣核酸或微核醣核酸的方法

有效

• 申請號: 201810144554.7
• 申請日: 2018-02-01
• 公開（公告）號: CN108374038B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 李利;胡家銘;郭廣柱
• 申請（專利權）人: 鑒識生物系統有限公司
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827;C12Q1/6837;C12Q1/6886
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 賀淑東

1.一種在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于該方法包括下述步驟:

提供生物樣本；和

在體外使用裝配具有堿基突出區段的分子信標的分析器測量上述的生物樣本和該具有堿基突出區段的分子信標進行交互作用所產生的熒光信號，借此偵測上述生物樣本中存在的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸，其中上述的具有堿基突出區段的分子信標是由至少包含9個堿基對的骨干區、至少包含4個堿基的回路、至少包含5個與上述的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸互補的堿基的堿基突出區段、熒光分子基團和熒光淬滅基團所構成，其中上述的堿基突出區段的最后一個互補堿基或上述骨干區的第一個堿基是對應于上述的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的單點突變的堿基。

2.如權利要求1所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于所述的熒光分子基團包括位置在5’末端的FAM,Cy3和Cy5。

3.如權利要求1所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于所述的熒光分子基團為位置接近上述的熒光淬滅基團的內標記熒光分子基團，其中該內標記熒光分子基團包含iFluorT,iCy3和iCy5。

4.如權利要求1所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于所述的具有堿基突出區段的分子信標是包裹在脂質復合體納米粒的內層，該脂質復合體納米粒包括陽離子表面修飾化的脂質復合體納米粒和可借由抗體捕捉外泌體的脂質復合體納米粒。

5.如權利要求4所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于所述的脂質復合體納米粒是固定在芯片上，上述的芯片所偵測到的目標分子的含量是借由內標準物進行比對計算，上述的內標準物是包裹有信息核糖核酸或微核糖核酸的通用標準囊泡。

6.如權利要求1所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于所述的分析器還含有下述組件：多個微流體通道、包裹有如權利要求1所述的具有堿基突出區段的分子信標脂質復合體納米粒和偵測器，該偵測器包括全內反射熒光顯微鏡、熒光顯微鏡、堿基標定儀和熒光測量儀。

7.如權利要求1所述的在體外偵測生物樣本中的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的方法，其特征在于所述的生物樣本包含血液樣本、血清樣本、血漿樣本、尿液樣本、胃腸道組織分泌物樣本、呼吸道分泌物樣本和唾液樣本。

8.一種用于偵測變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的生物芯片，其特征在于該生物芯片包含基板和脂質復合體納米粒，所述的脂質復合體納米粒固定在該基板上并且包裹具有堿基突出區段的分子信標，該具有堿基突出區段的分子信標是由至少包含9個堿基對的骨干區、至少包含4個堿基的回路、至少包含5個與上述的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸互補的堿基的堿基突出區段、熒光分子基團和位于3’末端的熒光淬滅基團所構成，其中上述的堿基突出區段的最后一個互補堿基或上述的骨干區的第一個堿基是對應于上述的變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的單點突變的堿基，并且其中所述的具有堿基突出區段的分子信標是選自下列群組之一或其組合：SEQ ID No 2,SEQ ID No 4,SEQID No 5,SEQ ID No 6,SEQ ID No 7,SEQ ID No 9,SEQ ID No11,SEQ ID No 12和SEQ IDNo 13。

9.如權利要求8所述的用于偵測變異的基因、信息核糖核酸或微核糖核酸的生物芯片，其特征在于所述的SEQ ID No 4,SEQ ID No 5,SEQ ID No 6或其組合是用于偵測變異的KRAS基因。