[發明專利]高效能mRNA標記偵測試劑組的偵測方法

在審

• 申請號: 201810144169.2
• 申請日: 2018-02-12
• 公開（公告）號: CN108562575A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 林繡茹;楊智凱;吳昌翰;林維純
• 申請（專利權）人: 翊準國際生物科技股份有限公司;蘇州翊準基因科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;C12Q1/68
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;李宇

1.一種高效能mRNA標記偵測試劑組的偵測方法，系以十二種試劑參與基因芯片反應流程，其特征在于至少包括下列步驟：

RNA萃取步驟：于一基因芯片感測單元的待測檢體純化與標定區中，利用一基因芯片反應試劑單元中RNA萃取組件所包含蛋白酶試劑、RNA專用裂解試劑、磁珠保存/結合試劑、RNA清洗試劑及RNA回溶/保存試劑，對一待測檢體進行RNA萃取反應，將該待測檢體與由蛋白酶K及保存液所組成的蛋白酶試劑及由脫氧核酸酶、裂解配方及RNA保護配方所組成的RNA專用裂解試劑均勻地混合反應后，加入由磁珠、核酸結合配方及RNA保護配方所組成的磁珠保存/結合試劑均勻地混合反應后，以磁鐵固定磁珠去除反應溶液，加入由清潔劑及RNA保護配方所組成的RNA清洗試劑混合均勻，再以磁鐵固定磁珠去除反應溶液，并加入作為RNA回溶/保存試劑的RNA保存液均勻地混合反應后，以磁鐵固定磁珠，收集所得的mRNA溶液；

生物素標定步驟：利用該基因芯片反應試劑單元中生物素標定組件所包含生物素標定試劑及生物素免疫結合試劑，對上述mRNA溶液進行生物素標定，將該mRNA溶液加入由生物素標定核酸、核酸原料、核酸聚合酶、引子、及抗凍劑所組成的生物素標定試劑均勻地混合反應后，再加入由生物素免疫抗體、磷酸酶、及抗凍劑所組成的生物素免疫結合試劑均勻地混合反應后，取得以生物素標定的探針；

雜合反應步驟：將一基因芯片置入該基因芯片感測單元的基因芯片反應與顯像區中，利用該基因芯片反應試劑單元中雜合反應組件所包含雜合反應試劑，偕同上述探針對該基因芯片進行雜合反應，將該基因芯片加入由雜合反應配方、背景抑制配方、清潔劑、及無機鹽類所組成的雜合反應試劑均勻地混合反應后，再加入該探針反應3～4小時，經過一溫控單元對該基因芯片作二階段溫控，將該探針與該基因芯片進行雜合反應，取得雜合溶液，其中，該基因芯片系選定一寡核苷酸片段，并以兩個作為基因芯片反應質量控管依據的管家基因，將此包含多種目標基因的寡核苷酸片段固著于熱塑型材質的芯片上，形成在該基因芯片上被覆有標定特定序列者，而該寡核苷酸片段為人工合成的寡核苷酸溶液，其濃度介于10uM～200uM，序列長度介于40～60堿基，并與目標基因上所具有的特殊序列呈現互補的關系，該基因芯片將該寡核苷酸溶液以30標準升以上的量，分布于芯片基質上，將寡核苷酸片段重復及排列，干燥后以紫外光照射固化而成；以及

訊號偵測步驟：將上述雜合溶液移除，留下該基因芯片于該基因芯片反應與顯像區中，利用該基因芯片反應試劑單元中訊號偵測組件所包含緩沖清洗試劑、噪聲阻隔試劑及訊號顯示劑，對上述移除雜合溶液的基因芯片進行呈色反應，將該基因芯片上雜合后的探針加入由清潔劑及無機鹽類所組成的緩沖清洗試劑，于反應后移除，加入由清潔劑及背景抑制配方所組成的噪聲阻隔試劑，于反應后移除，再加入該訊號顯示劑，反應直到訊號產生，之后加入水清洗，直到訊號停止繼續產生，于烘干后即得到偵測結果。

2.根據權利要求1所述的高效能mRNA標記偵測試劑組的偵測方法，其特征在于，該熱塑性材質為聚丙烯或聚甲基丙烯酸甲酯。

3.根據權利要求1所述的高效能mRNA標記偵測試劑組的偵測方法，其特征在于，該訊號顯示劑為5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸-氯化硝基四氮唑蘭染色液。

4.根據權利要求1所述的高效能mRNA標記偵測試劑組的偵測方法，其特征在于，該基因芯片以β-肌動蛋白與甘油醛3-磷酸脫氫酶作為管家基因。

5.根據權利要求1所述的高效能mRNA標記偵測試劑組的偵測方法，其特征在于，該待測檢體為血液、體液、細胞培養或組織細胞。