[發(fā)明專(zhuān)利]用于香榧苗期性別鑒定的特異性分子標(biāo)記TGMI001

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810144040.1
• 申請(qǐng)日: 2018-02-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108165652B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧江杰;劉玉洋;葉生月;張敏;吳水木
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州師范大學(xué);桐廬縣農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化辦公室;景寧嘉樹(shù)農(nóng)業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司;桐廬翌鑫農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州君度專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 黃前澤

1.用于香榧苗期性別鑒定的特異性分子標(biāo)記TGMI001，其特征在于擴(kuò)增該分子標(biāo)記的擴(kuò)增引物如下：

上游引物TGMI001-F，如SEQ.ID No1所示；

下游引物TGMI001-R，如SEQ.ID No2所示。

2.權(quán)利要求1所述的用于香榧苗期性別鑒定的特異性分子標(biāo)記TGMI001在香榧苗期進(jìn)行雌雄性別鑒定的應(yīng)用。

3.一種利用如權(quán)利要求1所述的特異性分子標(biāo)記進(jìn)行香榧苗期性別鑒定的方法，其特征在于該方法首先提取待測(cè)香榧幼苗樣本的基因組DNA為模板，利用如權(quán)利要求1所述的特異性分子標(biāo)記TGMI001進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物；對(duì)得到的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，若電泳結(jié)果出現(xiàn)一條461bp的DNA條帶，則待測(cè)樣本為雄性個(gè)體；若電泳結(jié)果未出現(xiàn)一條461bp的DNA條帶，則待測(cè)樣本為雌性個(gè)體。

4.如權(quán)利要求3所述的鑒別方法，其特征在于PCR擴(kuò)增體系包括：含Mg²⁺ 的10×PCRBuffer 1μL，10mmol/L dNTPs 0.3μL，10μmol/L上游引物0.5μL，10μmol/L下游引物0.5μL，5U/μL Taq酶0.2μL，20ng/μL DNA模板 1μL，ddH₂O 6.5μL，共10μL。

5.如權(quán)利要求3所述的鑒別方法，其特征在于PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5分鐘；32個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94℃變性40秒，退火溫度59℃復(fù)性40秒，72℃延伸90秒；最后72℃延伸10分鐘。