[發明專利]檢測抗-Carp抗體的均相免疫檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810143200.0
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN110161249A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 廖智星;饒星;劉宇卉;李臨;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 北京科美生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/536;G01N21/76
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;方莉

本發明涉及一種檢測抗?Carp抗體的均相免疫檢測試劑盒及其制備方法和使用方法。本發明提供了一種抗?Carp抗體的均相免疫檢測試劑盒，該試劑盒所采用的檢測技術為光激化學發光免疫分析法，為一種均相反應體系，相較于現有的非均相反應體系檢測方法，存在著無需清洗、包被/標記工藝對抗原抗體的活性無影響、特異性高、靈敏度好、線性范圍寬、背景干擾小、反應速度快、操作簡便、技術要求不高等優點，并可實現全自動化高通量測試。

技術領域

本發明屬于免疫分析技術領域，具體涉及一種檢測抗-Carp抗體的均相免疫檢測試劑盒及其制備方法和使用方法。

背景技術

抗氨甲酰化蛋白抗體(anti-Carbamylated protein antibody，anti-Carp Ab)是最近幾年發現的與類風濕性關節炎(Rheumatoid arthritis，RA)疾病診斷和病程監控的密切相關的一個新的生物標志物。氨甲酰化是一種非酶介導的蛋白質翻譯后修飾方式，其具體過程是蛋白質的賴氨酸殘基在尿素的衍生物一氰酸酯或氰酸鹽的作用下轉變成高瓜氨酸殘基。該過程能打破人體免疫耐受并誘導自身免疫抗體抗-Carp抗體(anti-Carp Ab)的產生。

專利WO2012/105838A1及WO2016/014612A2中公開的anti-Carp Ab的檢測方法分別為以氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)和氨甲酰化人類α1抗胰蛋白酶(Car-hAlAT)作為抗原，采用免疫印跡法(Immunoblotting)及酶聯免疫吸附法(ELISA)進行測定。

專利WO2012/105838A1中的檢測方法存在的缺陷是：1、人體內的anti-Carp Ab是針對自身體內氨甲酰化蛋白所產生的抗體，而氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)作為動物源性的抗原，與人體自身氨甲酰化蛋白所具有的抗原表位并不完全相同；2、氨甲酰化胎牛血清中包含大量可與人類血清樣本中anti-CarpAb抗體及其他免疫球蛋白非特異性相互作用的蛋白質及其它復雜組分，導致實驗的背景值高，從而對結果分析產生干擾；3、氨甲酰化胎牛血清難以重復制備，存在著批間差異，可能會對實驗結果復現性產生影響；4、檢測的anti-CarpAb的亞型僅為IgA和IgG、并未對IgM和IgD型抗體進行檢測；5、采用免疫印跡法(Immunoblotting)進行檢測時實驗步驟較為復雜、不同檢測機構的實驗操作標準不一、耗時長、不能實現全自動高通量分析及采用動物血清作為二抗進行檢測時在印跡膜上產生的非特異性檢測條帶對實驗結果的干擾。

專利WO2016/014612A2中的檢測方法存在的缺陷是采用的是ELISA間接法對anti-Carp Ab進行檢測，檢測背景值較高、靈敏度較低、線性范圍窄、易產生假陽性的實驗結果；同時針對檢測不同亞型的抗體，需要采用相應的酶標二抗進行檢測，實驗操作較為繁瑣。

由此可見，現有的抗-Carp抗體檢測方法均為非均相反應體系，其存在檢測背景值較高、選擇性及重復性較差、靈敏度較低、線性范圍窄、反應速度較小、易產生假陽性的實驗結果等問題。

因此，為了克服現有檢測技術中存在的上述缺陷，需要研究開發出一種抗原特異性強、信號放大效果好、靈敏度高、線性范圍寬、操作簡單、測試更穩定的用于檢測anti-Carp Ab的均相免疫化學發光檢測試劑盒。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種抗-Carp抗體的均相免疫檢測試劑盒。該試劑盒采用高靈敏度和特異性的氨甲酰化人血清白蛋白作為抗原結合均相免疫化學發光檢測技術制成，其具有特異性強、信號放大效果好、靈敏度高、線性范圍寬、操作簡單、穩定性好和精密度高的優點。

為此，本發明第一方面提供檢測抗-Carp抗體或所述抗-Carp抗體與至少一種抗原形成的免疫復合物的存在的試劑在制備用于采用均相免疫檢測方法通過下列步驟評價受治療者的類風濕性關節炎的試劑中的用途：

a)提供來自懷疑患有類風濕性關節炎的受治療者的待測樣品；