[發(fā)明專利]檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的均相免疫檢測試劑盒及其應用

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• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN110161247A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設計）人: 饒星;廖智星;劉宇卉;李臨;其他發(fā)明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 北京科美生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京聿宏知識產(chǎn)權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;方莉

本發(fā)明提供了一種用于檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的均相免疫檢測試劑盒。該試劑盒基于雙抗原夾心反應模式，采用高靈敏度和特異性的環(huán)瓜氨酸肽偶聯(lián)載體蛋白作為抗原原料制成，其不僅能夠檢測出所有類型的抗瓜氨酸抗體，而且具有特異性強、信號放大效果好、靈敏度高、線性范圍寬、操作簡單、穩(wěn)定性好和精密度高的優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明屬于免疫分析技術領域，具體涉及一種用于檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體均相免疫檢測試劑盒及其制備方法和使用方法。

背景技術

抗環(huán)瓜氨酸肽(Anticycliccitrullinated peptide antibodies，抗CCP)抗體是一種新型的血清標志物，臨床檢驗實踐表明，抗CCP抗體的滴度通常和疾病的活動度相關，70-80％患者在疾病很早期就在血清和滑膜液中檢測出抗CCP抗體，此抗體具有高度的特異性和一定的預后價值。

目前研究用或商品化抗瓜氨酸抗體試劑盒均采用間接法檢測，尤其是采用ELISA間接法檢測。人體內(nèi)抗瓜氨酸抗體類型既有IgG，還有IgA、IgM，使用傳統(tǒng)間接法反應模式只能檢測IgG類型的抗體。而采用ELISA間接法檢測模式，不僅只能檢測IgG類型的抗體，而且靈敏度較低，特異性也較差，操作也較為繁瑣。

因此，目前亟需研究開發(fā)一種靈敏度高、特異性好、操作方法簡便，且能夠檢測所有類型抗體的抗環(huán)瓜氨酸肽抗體檢測試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種用于檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的均相免疫檢測試劑盒。該試劑盒不僅能夠檢測出所有類型的抗瓜氨酸抗體，而且具有特異性強、信號放大效果好、靈敏度高、線性范圍寬、操作簡單、穩(wěn)定性好和精密度高的優(yōu)點。

為此，本發(fā)明第一方面提供了一種制備用于檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的均相免疫檢測試劑盒的方法，其包括：

制備第一組合物，所述第一組合物包含組分a，所述組分a由能夠與單線態(tài)氧反應生成可檢測信號的受體以及與之結(jié)合的第一抗原構(gòu)成，其中所述第一抗原能夠與抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的抗原表位第一識別位點特異性結(jié)合；

制備第二組合物，所述第二組合物包含組分b，所述組分b由能夠與抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的抗原表位第二識別位點特異性結(jié)合的第二抗原以及與之結(jié)合的特異性配對物中的一個成員構(gòu)成；

制備第三組合物，所述第三組合物包含組分c，所述組分c由能夠在激發(fā)狀態(tài)產(chǎn)生單線態(tài)氧的供體以及與之結(jié)合的特異性配對物中的另一個成員構(gòu)成。

本發(fā)明中，所述第一抗原和所述第二抗原相同或不同，二者獨立地選自合成的含瓜氨酸的環(huán)型肽、含瓜氨酸的線型肽、由至少2個單一含瓜氨酸的肽段合成在一條肽鏈上形成的多肽、含有至少2個單一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物和瓜氨酸化蛋白。

在本發(fā)明的一些優(yōu)選的實施例中，第一抗原和所述第二抗原分別獨立地選自合成的含環(huán)瓜氨酸的環(huán)形肽、含瓜氨酸的線型肽、由至少2個單一含瓜氨酸的肽段合成在一條肽鏈上形成的多肽和含有至少2個單一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物。

在本發(fā)明的一些進一步優(yōu)選的實施例中，所述第一抗原和所述第二抗原分別獨立地為由2-4個含瓜氨酸的肽段合成在一條肽鏈上形成的多肽或含有2-4個單一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物；優(yōu)選所述含瓜氨酸的肽段選自SEQ ID No.1-4。

在本發(fā)明的一些具體優(yōu)選的實施例中，所述第一抗原通過中間體與受體相結(jié)合，所述中間體為親水性高分子物質(zhì)。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述中間體為蛋白質(zhì)，優(yōu)選選自血藍蛋白、卵清蛋白、牛血清白蛋白或牛甲狀腺球蛋白。

在本發(fā)明的另一些實施例中，所述中間體選自樹枝狀大分子、聚羧酸酯、聚巰基和聚乙二醇。

在本發(fā)明的一些優(yōu)選的實施例中，所述第二抗原與生物素結(jié)合，而所述供體與鏈霉親和素結(jié)合。