[發明專利]重組口蹄疫病毒樣顆粒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810142558.1
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN110156896A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 樓覺人
• 申請（專利權）人: 樓覺人
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/50;C12N15/62;C12N1/19;C12N7/04;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發明提供了一種重組口蹄疫病毒樣顆粒及其制備方法和應用。具體地，本發明以口蹄疫病毒結構蛋白構成的不含病毒核酸的病毒樣顆粒，該病毒樣顆粒免疫動物，能激起機體產生針對口蹄疫的免疫保護，且不具有傳染性，相比傳統滅活病毒疫苗有著更高的安全性。本發明還提供了上述重組口蹄疫病毒樣顆粒的制備方法。

技術領域

本發明涉及基因工程和免疫領域，更具體地涉及一種重組口蹄疫病毒樣顆粒及其制備方法和應用。

背景技術

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病毒傳染性高且傳播迅速。主要侵害偶蹄獸，偶見于人和其他動物。其臨診特征為口腔粘膜、蹄部和乳房皮膚發生水皰。口蹄疫在世界范圍內多有爆發，有強烈的傳染性,一旦發病傳播速度快,往往造成大流行,不易控制和消滅,帶來嚴重的經濟損失，被國際獸疫局(OIE)列為A類動物疫病名單之首,是世界各國檢疫和防疫的重點對象。我國也將其列為第一類動物傳染病的第一位。口蹄疫流行情況從過去的點發到現今的普發，從有季節性到無季節性。

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬的成員，該病毒宿主范圍廣，遺傳變異率高，抗原差異大，現存在七種血清型，0、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1，每種又有眾多個不同的亞型，血清型間無交叉免疫現象。即使是免疫動物在接觸新病毒后，也可形成隱性感染而持續帶毒，在免疫和非免疫條件下病毒均可適應機體而長期存在。其中O型血清型最為常見，A型口蹄疫目前在我國只是零星散發。成年動物感染口蹄疫后大部分能康復，但有時幼畜病死率可達100％，能夠造成感染動物相關的生產力下降，成為制約國際、國內動物和動物產品貿易的主要障礙。

疫苗免疫是控制和預防口蹄疫流行的有效技術方法。目前市場上主要采用的疫苗是病毒滅活疫苗，該類口蹄疫疫苗存在以下缺點：(1)穩定性差，保護期短，防疫效果不理想；(2)制備過程中存在散毒的安全隱患，需要P3級安全防護，成本高、操作難；(3)制備過程中，非結構蛋白去除不徹底，會造成區分自然感染及免疫動物的困難；(4)滅活不徹底將存在安全性問題。

因此，本領域迫切需要開發安全、高效、經濟的新型口蹄疫疫苗。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型重組口蹄疫病毒樣顆粒及其制備方法和應用。

具體地，本發明的目的在于提供一種新型口蹄疫病毒樣顆粒的基因序列及蛋白序列，并提供了該病毒樣顆粒的制備方法，該病毒樣顆粒應用于提高免疫動物對口蹄疫病毒的免疫保護力，降低動物口蹄疫的發病率。

在本發明的第一方面，提供了一種融合蛋白，所述的融合蛋白從N端至C端具有式I結構：

P1－2A－3C (I)

式中，

P1為口蹄疫病毒外殼結構蛋白VP元件，

2A為非結構蛋白2A蛋白酶，

3C為非結構蛋白3C蛋白酶，其中，所述P1-2A元件可在酶3C的酶切作用下，形成VP0蛋白、VP3蛋白和VP1蛋白。

在另一優選例中，所述的融合蛋白可自剪切并釋放出3C蛋白酶。

在另一優選例中，所述的酶3C是源自所述融合蛋白的3C蛋白酶。

在另一優選例中，所述的VP0蛋白、VP3蛋白和VP1蛋白可以自我組裝成與天然口蹄疫病毒非常相似的VLP。

在另一優選例中，所述非常相似是指所述VLP與天然口蹄疫病毒的相似度≥80％，較佳地，≥90％。