[發明專利]一種五嶺龍膽種子再生體系建立及快速繁育方法

有效

• 申請號: 201810141694.9
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN108243961B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 陳世品;肖春梅;馬良;林文俊;何碧珠;郜祥雄
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種五嶺龍膽種子再生體系建立及快速繁育方法，其特征在于：包括如下步驟：

1）材料選取與消毒：采摘當年80-90%成熟莢果用洗滌劑漂洗干凈，再置于流水中沖洗20分鐘；種子消毒處理：將莢果進行清洗，置飽和漂白粉上清液中浸泡15min，并用軟毛刷刷洗莢果外部，沖洗干凈后，自來水下滴沖0.5-1h，雙蒸水沖蕩2-3次，置超凈工作臺內用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞處理10-13min，將汞液倒入廢汞瓶，無菌水沖3-4遍后，用消毒濾紙吸干表面水分后，待用；

2）誘導培養：取飽滿經消毒處理后的莢果用槍狀鑷夾住莢果，手術刀順著莢果垂直方向剖開，取出莢果內種子，分別接種于經高溫、高壓滅菌的芽誘導培養基中；培養條件：接種后5-8d在無燈光條件下培養，無燈光培養結束后光照強度調整為1000～1500lx，培養室溫度為23±2℃，光照時間5h/d，培養時間15-20d，得到誘導芽植株；

3）增殖培養：將經上述誘導培養，所得到的生長良好的芽植株切成莖段長1.0-1.5cm，接種在增殖培養基中，光照時間10h/d，光照強度1500～2000lx，增殖培養時間20-30d，得到增殖培養的幼苗；

4）誘導生根：將增殖培養出來帶有葉2-3片，株高3-4cm無根幼苗單株切下，轉移到生根培養基中；光照時間10h/d，光照強度1500-2000lx，誘導生根時間15-20d，得到誘導生根的幼苗；

5）試管苗培養完成：當誘導生根培養試管苗生長至高5-6cm，根3-5條，葉5片，葉長2-3cm時完成五嶺龍膽種子誘導萌發及快速微繁殖培養；

6）將完成生根培養試管瓶苗放在自然光下煉苗5-7天后，打開瓶蓋煉苗1-2天，以增強試管苗對室外環境的適應能力；然后從培養瓶中取出培養植株，洗去附著在根系的殘留培養基，移入蛭石和腐殖土的質量比1:2混合的基質中，保濕遮陰，溫度控制在15-30℃，濕度應保持在75％-85％，避免陽光直射；2-3周后植株適應能力逐漸增強，獲得自然生長健壯完整種苗；

所述芽誘導培養基為N₆+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂粉+1.0 g·L^-1活性炭； pH值為5.8；

所述增殖培養基為N₆+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 瓊脂粉+1.0g·L^-1活性炭； pH值為5.8；

所述生根培養基為1/2N₆+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂粉+1.5g·L^-1活性炭； pH值為5.8。