[發明專利]一種檢測脂聯素的膠體金試紙條及其定量檢測方法

在審

• 申請號: 201810141218.7
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108169494A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 夏宣喜;賴華;孔浩杰;劉志文
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/92
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國;徐進之

1.一種檢測脂聯素的膠體金試紙條，包括PVC襯板、硝酸纖維素膜、耦合物結合墊片、樣本墊片及吸水墊片，其特征在于，所述PVC襯板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜的一端粘貼有耦合物結合墊片，另一端粘貼有吸水墊片，所述耦合物結合墊片上粘貼有樣本墊片；

所述硝酸纖維素膜上設置有測試帶和控制帶，所述測試帶內包被有鼠抗脂聯素抗體，所述控制帶內包被有兔抗鼠抗體；所述耦合物結合墊片包被有膠體金標記脂聯素抗體。

2.如權利要求1所述的檢測脂聯素的膠體金試紙條，其特征在于，所述檢測脂聯素的膠體金試紙條還包括殼體，所述殼體上設置有加樣窗口和檢測窗口，所述加樣窗口位于所述樣本墊片處，所述檢測窗口位于所述測試帶和所述控制帶處。

3.如權利要求1所述的檢測脂聯素的膠體金試紙條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜按如下步驟制備：

分別將測試帶抗體原液和控制帶抗體原液在4℃下以6000～13000r/min速度離心60min，吸取兩種上清液；

將兩種上清液分別裝入透析袋，用雙蒸水透析去除鹽分后，超濾濃縮后裝瓶冷凍，得到測試帶抗體和控制帶抗體；

用pH值為6.5～6.7的磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液分別稀釋兩種抗體，得到0.8mg/ml測試帶包被液和0.8mg/ml控制帶包被液；

將所述測試帶包被液和所述控制帶包被液分別噴涂在硝酸纖維素膜對應的測試帶和控制帶位置，噴涂量為1μL/cm；

再將包被好硝酸纖維素膜置于37℃溫度下烘干。

4.如權利要求3所述的檢測脂聯素的膠體金試紙條，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液按重量計包括：Na₂HPO₄0.263-0.376份，KH₂PO₄1.000-1.109份，NaCl6份，KCl0.2份，蒸餾水1000份；

所述Tris緩沖液按重量計包括：三羥甲基氨基甲烷4.6-5.5份，KH₂PO₄2.0-3.0份，NaCl8份，KCl0.4份，牛血清白蛋白9份，蒸餾水1200份。

5.如權利要求1所述的檢測脂聯素的膠體金試紙條，其特征在于，所述膠體金標記脂聯素抗體按如下步驟制備：

將質量分數為1％氯金酸與雙蒸水按體積比1∶79配成A液；將質量分數為1％檸檬酸三鈉、質量分數為1％鞣酸、25mM K₂CO₃與雙蒸水按體積比4∶0.035～0.080∶0.035～0.080∶15.84～15.93配成B液；再將所述A液和所述B液在水浴內同時加熱到59～61℃，攪拌A液，快速加入B液，繼續攪拌1分鐘，在10～13分鐘內加熱至沸騰，得到膠體金液；

利用0.25M K₂CO₃調整所述膠體金液的pH值為6.8～7.1；

將人血清白蛋白標記抗體原液在4℃下6000～13000r/min離心60分鐘，吸取上清液；將所述上清液裝入透析袋，用雙蒸水透析去除鹽分后，裝瓶冷凍，得到脂聯素抗體；

將0.27～0.30mg脂聯素抗體緩慢加入100ml膠體金液中進行標記，攪拌15分鐘后，依次加入10％迭氮鈉500μl和1％牛血清白蛋白100μl，攪勻后在2.5～4.0℃，6000r/min條件下離心30分鐘，去除上清液，沉淀物即為膠體金標記脂聯素抗體。

6.如權利要求5所述的檢測脂聯素的膠體金試紙條，其特征在于，所述檸檬酸三鈉、鞣酸、K₂CO₃與雙蒸水的體積比為4:0.08:0.08:15.84，所述膠體金液中膠體金顆粒的直徑范圍為10nm～11nm。

7.如權利要求1所述的檢測脂聯素的膠體金試紙條，其特征在于，所述樣本墊片為經過pH值為6.5～6.7的封閉液封閉處理的玻璃纖維墊片，所述封閉液為含有2.0％吐溫-20、0.5％牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。