[發明專利]一種檢測脂聯素的膠體金試紙條及其定量檢測方法

在審

• 申請號: 201810141218.7
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108169494A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 夏宣喜;賴華;孔浩杰;劉志文
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/92
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國;徐進之

本發明公開一種檢測脂聯素的膠體金試紙條及其定量檢測方法，其中，所述檢測脂聯素的膠體金試紙條包括PVC襯板、硝酸纖維素膜、耦合物結合墊片、樣本墊片及吸水墊片，所述PVC襯板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜的一端粘貼有耦合物結合墊片，另一端粘貼有吸水墊片，所述耦合物結合墊片上粘貼有樣本墊片；所述硝酸纖維素膜上設置有測試帶和控制帶，所述測試帶內包被有鼠抗脂聯素抗體，所述控制帶內包被有兔抗鼠抗體；所述耦合物結合墊片包被有膠體金標記脂聯素抗體。本發明的檢測脂聯素的膠體金試紙條具有方便快捷，操作簡單，耗時較短，便于臨床推廣應用等優點。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域，特別涉及一種檢測脂聯素的膠體金試紙條及其定量檢測方法。

背景技術

脂肪組織(adipose tissue)主要由大量聚集成團的脂肪細胞構成，脂聯素(Adiponectin)是脂肪細胞分泌的一種內源性生物活性多肽或蛋白質。正常人血清中脂聯素的濃度范圍在3～30μg/mL，占血漿蛋白總量的0.01％，不隨飲食或晝夜節律而改變，女性血清中的脂聯素含量大于男性。隨著對脂聯素研究的不斷深入，已發現，脂聯素在肥胖癥患者和II型糖尿病患者血清中的濃度明顯低于非肥胖者，其濃度的降低導致了胰島素抵抗和高胰島素血癥，而脂聯素有防止動脈粥樣硬化斑塊形成的作用，因此，脂聯素與肥胖癥患者II型糖尿病及冠心病的發生發展密切相關，即脂聯素的明顯降低預示著II型糖尿病及冠心病的發生明顯增加。測定血中脂聯素水平，對這些疾病的診斷和預后有重要意義。

而現有技術中一般采用酶聯免疫分析試劑盒來檢測脂聯素濃度，雖然酶聯免疫法檢測的準確度較高，但是該方法檢測過程繁瑣，耗時較長，且樣本需要批量檢測，不適用于及時檢測。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種檢測脂聯素的膠體金試紙條及其定量檢測方法，具有方便快捷、操作簡單、耗時較短的特點。

為實現上述目的，本發明提出的檢測脂聯素的膠體金試紙條，包括PVC襯板、硝酸纖維素膜、耦合物結合墊片、樣本墊片及吸水墊片，所述PVC襯板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜的一端粘貼有耦合物結合墊片，另一端粘貼有吸水墊片，所述耦合物結合墊片上粘貼有樣本墊片；所述硝酸纖維素膜上設置有測試帶和控制帶，所述測試帶內包被有鼠抗脂聯素抗體，所述控制帶內包被有兔抗鼠抗體；所述耦合物結合墊片包被有膠體金標記脂聯素抗體。

優選地，所述檢測脂聯素的膠體金試紙條還包括殼體，所述殼體上設置有加樣窗口和檢測窗口，所述加樣窗口位于所述樣本墊片處，所述檢測窗口位于所述測試帶和所述控制帶處。

優選地，所述硝酸纖維素膜按如下步驟制備：

分別將測試帶抗體原液和控制帶抗體原液在4℃下以6000～13000r/min速度離心60min，吸取兩種上清液；

將兩種上清液分別裝入透析袋，用雙蒸水透析去除鹽分后，超濾濃縮后裝瓶冷凍，得到測試帶抗體和控制帶抗體；

用pH值為6.5～6.7的磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液分別稀釋兩種抗體，得到0.8mg/ml測試帶包被液和0.8mg/ml控制帶包被液；

將所述測試帶包被液和所述控制帶包被液分別噴涂在硝酸纖維素膜對應的測試帶和控制帶位置，噴涂量為1μL/cm；

再將包被好硝酸纖維素膜置于37℃溫度下烘干。

優選地，所述樣本稀釋液包括磷酸鹽緩沖液和/或Tris緩沖液。所述磷酸鹽緩沖液按重量計包括：Na₂HPO₄0.263-0.376份，KH₂PO₄1.000-1.109份，NaCl6份，KCl0.2份，蒸餾水1000份；