[發明專利]檢測25-羥基維生素D的熒光層析試劑盒及其定量檢測方法

在審

• 申請號: 201810139923.3
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108181465A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 夏宣喜;賴華;朱華琳;鄧曉俠
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國;徐進之

本發明公開一種檢測25?羥基維生素D的熒光層析試劑盒及其定量檢測方法，其中，所述檢測25?羥基維生素D的熒光層析試劑盒包括試紙條，試紙條包括PVC襯板、硝酸纖維素膜、偶合物結合墊片、樣本墊片及吸水墊片，PVC襯板上粘貼有硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜的一端粘貼有偶合物結合墊片，另一端粘貼有吸水墊片，偶合物結合墊片上粘貼有樣本墊片；硝酸纖維素膜上設有測試帶和控制帶，測試帶包被有鼠抗25?羥基維生素D抗體，控制帶包被有兔抗鼠抗體；偶合物結合墊片包被有熒光標記25?羥基維生素D抗體。本發明的檢測25?羥基維生素D的熒光層析試劑盒靈敏度高、穩定性好，有利于進行臨床推廣應用。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域，特別涉及一種檢測25-羥基維生素D的熒光層析試劑盒及其定量檢測方法。

背景技術

維生素D為類固醇衍生物，屬脂溶性維生素。人體內的維生素D主要由皮膚受紫外線照射后合成，只有少部分通過從食物或補充品中攝入，25-羥基維生素D是維生素D在人體內的主要存在形式。研究證實維生素D不僅只是影響鈣磷代謝，而且還具有廣泛的生理作用，其在維持人體的健康、細胞的生長和發育方面不可或缺，維生素D與多種疾病密切相關。而25-羥維生素D是代謝中的主要循環形式，能反映機體的維生素D儲存水平并與維生素D缺乏的臨床癥狀相關聯，因此25-羥基維生素D是衡量維生素D體內水平的最可靠的臨床指標。

25-羥基維生素D檢測的臨床應用主要與佝僂病(兒童)，骨軟化癥、絕經后骨質疏松和腎性骨病的診斷、治療和監測有關。目前25-羥維生素D的測定方法主要有酶聯免疫法、放射免疫法、液相色譜-質譜檢測法以及化學發光法。酶聯免疫法自動化程度不高，且受人為因素影響較大。放射免疫法存在著環境污染問題；液相色譜質譜操作復雜，用時較長；而化學發光法靈敏度雖高，但這種方法學對儀器的要求較高，試劑為大包裝，必須低溫保存；因此限制了其在臨床上的應用，特別是在基層醫院的推廣應用。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種檢測25-羥基維生素D的熒光層析試劑盒及其定量檢測方法，具有操作簡單、靈敏度高、穩定性好的特點，有利于進行臨床推廣應用，特別適合在基層醫院、診所以及體檢中心等單位使用。

為實現上述目的，本發明提出的檢測25-羥基維生素D的熒光層析試劑盒，包括試紙殼和樣本稀釋液，所述試紙殼上設置有加樣窗口和檢測窗口，所述試紙殼內設有試紙條，所述試紙條包括PVC襯板、硝酸纖維素膜、偶合物結合墊片、樣本墊片及吸水墊片，所述PVC襯板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜的一端粘貼有偶合物結合墊片，另一端粘貼有吸水墊片，所述偶合物結合墊片上粘貼有樣本墊片；所述硝酸纖維素膜上設置有測試帶和控制帶，所述測試帶內包被有鼠抗25-羥基維生素D抗體，所述控制帶內包被有兔抗鼠抗體；所述偶合物結合墊片包被有熒光標記25-羥基維生素D抗體；其中，所述樣本墊片位于所述加樣窗口處，所述測試帶和所述控制帶位于所述檢測窗口處。

優選地，所述硝酸纖維素膜按如下步驟制備：

分別將測試帶抗體原液和控制帶抗體原液在4℃下以6000～13000r/min速度離心60min，吸取兩種上清液；

將兩種上清液分別裝入透析袋，用雙蒸水透析去除鹽分后，超濾濃縮后裝瓶冷凍，得到測試帶抗體和控制帶抗體；

用pH值為6.5～6.7的磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液分別稀釋兩種抗體，得到0.8mg/ml測試帶包被液和0.8mg/ml控制帶包被液；

將所述測試帶包被液和所述控制帶包被液分別噴涂在硝酸纖維素膜對應的測試帶和控制帶位置，噴涂量為1μL/cm；

再將包被好硝酸纖維素膜置于37℃溫度下烘干。