[發明專利]豬流行性腹瀉病毒及其分離方法和應用在審
| 申請號： | 201810139481.2 | 申請日： | 2018-02-09 |
| 公開（公告）號： | CN108130316A | 公開（公告）日： | 2018-06-08 |
| 發明（設計）人： | 杜久斌;李延濤;賀筍;李俊輝 | 申請（專利權）人： | 天康生物股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N7/02 | 分類號： | C12N7/02;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 楊靜安 |
| 地址： | 830000 新疆維吾爾自治區*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 豬流行性腹瀉病毒 生物技術領域 組織滅活疫苗 流行性腹瀉 病毒效價 分離純化 聚乙二醇 免疫效果 有效地 雜蛋白 制備 種豬 應用 疫苗 病毒 | ||
1.一種豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，采用聚乙二醇6000對豬流行性腹瀉病毒進行分離。
2.根據權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，所述分離方法包括：
提供豬流行性腹瀉組織病料進行處理后得到的上清液，將聚乙二醇6000及鈉鹽加入所述上清液中并進行一次離心，得到沉淀，將所述沉淀重懸并進行二次離心，收集二次離心上清液，得到所述豬流行性腹瀉病毒。
3.根據權利要求2所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，將豬流行性腹瀉組織病料進行研磨后反復凍融，然后加入3-5倍體積的緩沖液混勻，離心，得到所述豬流行性腹瀉組織病料進行處理后得到的上清液；
優選地，所述豬流行性腹瀉組織病料為發病仔豬腸組織；
優選地，所述反復凍融為在-20℃下反復凍融2-4次，優選為3次。
4.根據權利要求3所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，加入3-5倍體積的緩沖液混勻，在4℃靜置1-3小時后，取上清進行離心，得到所述豬流行性腹瀉組織病料進行處理后得到的上清液；
優選地，所述離心的條件為4℃，4500-5500r/min離心25-35分鐘。
5.根據權利要求2所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，所述聚乙二醇6000在上清液中的終濃度為6％-10％，優選為7％-9％，更優選為8％；
所述鈉鹽在上清液中的終濃度為0.1％-2％，優選為0.5％-1.5％，更優選為1％。
6.根據權利要求2所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，將聚乙二醇6000及鈉鹽加入所述上清液并調節pH為6.5-8，攪拌均勻后靜置；
優選地，所述攪拌的條件為100-200r/min攪拌15-25分鐘；
優選地，所述靜置的條件為在4℃靜置1-3小時。
7.根據權利要求6所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，取靜置后的上清液進行一次離心，得到沉淀；
優選地，所述一次離心的條件為4℃，8000-12000r/min離心15-25分鐘。
8.根據權利要求2所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法，其特征在于，將所述沉淀用緩沖液清洗后，再用緩沖液進行重懸并進行二次離心，收集二次離心上清液，得到所述豬流行性腹瀉病毒；
優選地，重懸加入緩沖液的體積為離心前總體積的40％-60％；
優選地，所述二次離心的條件為4℃，8000-12000r/min離心25-35分鐘。
9.一種豬流行性腹瀉病毒，其特征在于，應用權利要求1-8任一項所述的豬流行性腹瀉病毒的分離純化方法分離得到。
10.如權利要求9所述的豬流行性腹瀉病毒在制備組織滅活疫苗中的應用。
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