[發明專利]RT-PCR檢測獼猴桃潰瘍病原菌的引物及檢測方法

有效

• 申請號: 201810138696.2
• 申請日: 2018-02-10
• 公開（公告）號: CN108179206B
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 胡容平;石軍;陳松;葉慧麗;陳慶東;林立金
• 申請（專利權）人: 四川省農業科學院植物保護研究所;綿陽市農業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/38
• 代理公司: 成都帝鵬知識產權代理事務所(普通合伙) 51265
• 代理人: 黎照西

本發明提供了一種實時熒光RT?PCR檢測獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的特異性引物，其由正向引物和反向引物組成，所述正向引物為：5＇?CCGCTGTGATACAATTCGGC?3＇，如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物為：5＇?CGCACATAAGACAACAGGCG?3＇，如SEQ ID NO.2所示；利用所述特異性引物進行實時熒光RT?PCR檢測比進行普通PCR檢測的靈敏度至少提高100倍。本發明還提供基于該特異性引物的試劑盒、檢測方法和應用。

技術領域

本發明屬于農業及植物檢疫技術領域，具體涉及一種實時熒光RT-PCR檢測獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的引物及其檢測方法和應用。

背景技術

獼猴桃被稱為水果之王和維生素C之冠，具有較高的經濟效益，國內的主要種植區有四川、陜西和貴州等地。對于獼猴桃病害的檢測、防控，是提高其經濟價值，促進地區獼猴桃行業經濟發展的必要手段。

潰瘍病是一種嚴重威脅獼猴桃生產的致命性細菌性病害，被列為全國森林植物檢疫對象。美國、新西蘭、日本、中國的專家學者先后開展了獼猴桃潰瘍病菌鑒定，但對于該致病變種的歸屬尚無定論，目前對于該病害的病原菌認定主要有獼猴桃致病變種(Pseudomonas syringaepv.Actinidiae，Psa)、丁香致病變種(Pseudomonas syringaepv.Syringae)和死李致病變種(Pseudomonas syringae pv.Morsprunorum)。獼猴桃潰瘍病原菌在6月中旬至9月底有很高的產孢能力，當獼猴桃幼果感染病原菌時，會嚴重影響果實的生長，在6月感染時，容易發生采前落果，該病原菌對于果底部和果中部均有較強的侵染能力。

實時熒光RT-PCR檢測法具有獨特的優勢，可以精確的檢測不同組織、不同材料中病原菌的相對含量，得到了廣泛的應用，如中國專利ZL 201610858546.X公布了一種實時熒光定量PCR檢測土壤西瓜枯萎病菌的方法及引物，中國專利ZL 201410089841.4公布了一種檢測大白菜黃萎病病原菌的實時熒光定量PCR方法。

不過，在對獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的檢測方面，尚未發現效果較好的實時熒光RT-PCR檢測的特異性引物。

因此，研究開發適于檢測獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的實時熒光RT-PCR檢測的特異性引物及其檢測方法，對于獼猴桃潰瘍病的檢測、預防和控制具有良好的學術價值和經濟意義。

發明內容

針對現有技術的缺點，本發明的目的之一在于提供一種實時熒光RT-PCR檢測獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的特異性引物，其中，所述特異性引物由正向引物和反向引物組成，所述正向引物為：5＇-CCGCTGTGATACAATTCGGC-3＇，如SEQ IDNO.1所示，所述反向引物為：5＇-CGCACATAAGACAACAGGCG-3＇，如SEQ ID NO.2所示；利用所述特異性引物對獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae進行實時熒光RT-PCR檢測比進行普通PCR檢測的靈敏度至少提高100倍。

本發明的目的之二在于提供包含上述特異性引物的實時熒光RT-PCR檢測獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的試劑盒。

本發明的目的之三在于提供一種實時熒光RT-PCR檢測獼猴桃潰瘍病原菌Pseudomonas syringaepv.actinidae的方法，所述方法包括如下步驟：