[發明專利]一種基于離子液體快速檢測食品中汞含量的方法

有效

• 申請號: 201810138308.0
• 申請日: 2018-02-10
• 公開（公告）號: CN110146452B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 婁新徽;黃旸;薛穎;王正
• 申請（專利權）人: 首都師范大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/44;G01N1/34;G01N21/64
• 代理公司: 北京展翅星辰知識產權代理有限公司 11693
• 代理人: 王文生

1.一種基于離子液體快速檢測食品中汞含量的方法,包括三個步驟：步驟一、待測食品樣品的消解；步驟二、用離子液體將汞離子從食品硝解液中萃取出來，該離子液體為N-辛基吡啶四氟硼酸或者1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽與吡咯烷二硫代甲酸銨或者1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽與吡咯烷二硫代甲酸銨，離心分離后取出離心管底部的離子液體；步驟三、配制 脫氧核酶寡核苷酸EAD2溶液，恒溫加熱，然后緩冷,在上述EAD2溶液中加入氯化血紅素，孵育，形成脫氧核酶復合物,離心所得的離子液體與脫氧核酶復合物混合，孵育,離心，取上層脫氧核酶復合物，稀釋,然后同時加入ABTS和過氧化氫，當食品消解液樣品中沒有汞離子時，離子液體萃取脫氧核酶反應體系中的脫氧核酶，使脫氧核酶失活，反應體系不顯色；當食品消解液樣品中有汞離子時，離子液體的活性位點被汞離子占據，萃取脫氧核酶的能力減弱，脫氧核酶活性保持，反應體系顯綠色，其顏色的深淺與樣品中汞離子濃度成正比，從而實現對汞離子的定量檢測，根據顏色定性判斷汞離子的濃度，或者檢測水相在418nm處的紫外可見光的吸收值，根據工作曲線確定汞離子的濃度。

2.根據權利要求1所述的檢測食品中汞含量的方法,其特征在于，步驟一為樣品的微波消解：稱取樣品置于微波消解罐中，加入消解液，進行微波消解，同時做試劑空白，消解結束冷卻后將消解罐開蓋置于石墨消解儀中加熱，用水將硝解液稀釋，待用。

3.根據權利要求1或2所述的檢測食品中汞含量的方法，其特征在于，步驟二中，取10μLN-辛基吡啶四氟硼酸加入到1mL稀釋后的樣品硝解液中，80℃下加熱10min，再冰浴猝冷10min，8000r/min離心10min分離取離心管底部的N-辛基吡啶四氟硼酸，加入離心分離的離子液體5倍體積的超純水，用槍打勻，超聲5min，猝冷10min離心，去除上清，重復兩次。

4.根據權利要求1或2所述的檢測食品中汞含量的方法，其特征在于，步驟三中，配制60μL 0.5μM脫氧核酶寡核苷酸EAD2溶液，95℃恒溫加熱6分鐘，緩冷至37℃，在上述EAD2溶液中加入氯化血紅素，25℃孵育90min，形成脫氧核酶復合物，2μL離心所得的離子液體與40μL脫氧核酶復合物，25℃孵育30min，8000r/min離心，取上層35μL脫氧核酶復合物，加緩沖溶液A稀釋至100μL，然后同時加入3.75mM 10μL的ABTS和15mM 5μL的過氧化氫。

5.根據權利要求1或2所述的檢測食品中汞含量的方法，其特征在于，所述工作曲線的繪制包括如下步驟：1)在離子液體中加入不同濃度的汞離子，加熱孵育，冰浴猝冷，離心分離離子液體；

2)配置一定濃度的脫氧核酶寡核苷酸的緩沖溶液，加熱，緩冷至室溫；加入氯化血紅素，與脫氧核酶寡核苷酸充分混合并孵育半小時；

3)將離心分離的離子液體加入氯化血紅素和脫氧核酶寡核苷酸的混合溶液，孵育；

4)離心，取上層水溶液，加入2,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽和過氧化氫溶液；

5)用紫外分光光度計測定產物418nm處的紫外吸收，繪制工作曲線。