[發明專利]一種制備埃博拉病毒核蛋白抗原的基因工程菌及應用在審
| 申請號: | 201810137429.3 | 申請日: | 2018-02-10 |
| 公開(公告)號: | CN108342348A | 公開(公告)日: | 2018-07-31 |
| 發明(設計)人: | 黃弋;袁志明;朱友杰;楊夢詩 | 申請(專利權)人: | 中國科學院武漢病毒研究所 |
| 主分類號: | C12N1/21 | 分類號: | C12N1/21;C12N15/70;C12P21/02;G01N33/569;C12R1/19 |
| 代理公司: | 武漢宇晨專利事務所 42001 | 代理人: | 龔瑩瑩 |
| 地址: | 430071 湖北*** | 國省代碼: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 埃博拉病毒 制備 核蛋白抗原 抗原 間接ELISA檢測 基因工程菌 核蛋白 應用 基因工程菌株 超聲破碎 抗原性質 抗原性 靈敏度 誘導 檢測 | ||
1.一種基因工程菌,所述的基因工程菌為:大腸桿菌 Escherichia coli Bl21(DE3)/pET-28a- ZEBOV-NP,保藏編號為:CCTCC NO:2014548。
2.權利要求1所述的基因工程菌在制備埃博拉病毒核蛋白抗原中的應用。
3.一種埃博拉病毒核蛋白抗原的制備方法,包括:向大腸桿菌 Escherichia coliBl21(DE3)/pET-28a- ZEBOV-NP 培養物中加入IPTG誘導蛋白表達,然后破碎細菌,離心,收集上清。
4.權利要求1所述的基因工程菌或權利要求3所述方法制備的抗原在制備埃博拉病毒ELISA檢測試劑盒中的應用。
5.根據權利要求3所述的方法,其特征在于:大腸桿菌 Escherichia coli Bl21(DE3)/pET-28a-ZEBOV-NP過夜培養物按1:100加至新鮮LB,37 ℃培養3 h,測OD600=0.2~0.4;加入誘導劑IPTG誘導蛋白表達,誘導條件為:IPTG濃度0.4mM、誘導溫度37℃、誘導時間3h;誘導完畢,8,000 rpm離心10 min,分離得到菌體;倒盡培養基殘液,使用適量PBS重懸菌體(通常使用培養菌液的1/10體積),超聲波破碎細胞至OD600<0.1,12,000 rpm離心10 min,收集上清。
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