[發明專利]一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標記中的應用

有效

• 申請號: 201810136573.5
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108344722B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 吳勇權;曾紅;范小林;李勛;郭維
• 申請（專利權）人: 贛南師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標記中的應用，所述近紅外氧雜蒽類熒光染料具有式I所示結構。在本發明中，所述具有式I所示結構的近紅外氧雜蒽類熒光染料(NIR?RB)，其發射峰位于近紅外區域，在活體熒光成像中具有良好的光穿透性能。采用本發明提供的NIR?RB能夠對血吸蟲成蟲進行熒光標記成像；同時，對血吸蟲成蟲熒光強度進行了定量分析，蟲體區域和背景區域的熒光信號信噪比S/N10，表明NIR?RB用于血吸蟲成蟲的熒光成像具有高信噪比。

技術領域

本發明涉及生物光學標記技術領域，尤其涉及一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標記中的應用。

背景技術

血吸蟲病是一種盛行于熱帶和亞熱帶地區、對人民身體健康有嚴重危害并影響社會經濟發展的傳染病，被世界衛生組織(WHO)列為極易復現的再現傳染病。血吸蟲病流行于74個國家和地區，全世界目前約有6.52億人口受威脅，有1.93億感染者，有癥狀病例約1.2億，其中2000萬為嚴重病例，中國是血吸蟲病的主要流行區。

熒光成像能夠用于血吸蟲研究方面，Andrea等(Schistosoma mansoni:Use of afluorescent indicator to detect nitric oxide and related species in livingparasites.Andrea B.Kohn Jeanne M.Lea Leonid L.Moroz and RobertM.Greenberg.Experimental Parasitology.2006,113,130-133)采用熒光探針檢測血吸蟲體內一氧化氮的含量，研究結果發現蟲體一氧化氮的釋放依賴于一氧化氮合酶。SATO等(Functional visualization of the excretory system of adult Schistosomamansoni by the fluorescent marker resorufin.H.SATO,J.R.KUSEL,J.THORNHILL.Parasitology.2002,125,527-535)應用熒光成像的方法觀察曼氏血吸蟲成蟲的排泄系統，其研究結果將有助于了解曼氏血吸蟲原腎系的生理功能。

但是，上述研究中均使用傳統有機熒光染料，如試鹵靈，作為熒光探針對血吸蟲成蟲進行研究，存在以下缺點：(1)短波長激發與發射存在生物自發背景熒光干擾；(2)大部分的熒光探針光穩定性差，導致不能長時間熒光觀察；(3)大部分有機小分子熒光染料親水性差，限制了其生物應用。同時，血吸蟲成蟲結構具有以下特征：(1)血吸蟲成蟲寄生于哺乳動物血管中，體表與宿主血液直接接觸，為了逃避宿主的免疫性攻擊，體被覆蓋了一種與宿主紅細胞ab抗原相同的特異性糖類，成蟲體表呈現較強的親水性；(2)血吸蟲成蟲個體較大，對熒光的穿透性要求較高。由此可知，現有技術中的熒光染料和血吸蟲成蟲的生理結構特征之間是存在相互矛盾的，從而導致了血吸蟲成蟲熒光成像過程中熒光染色效果差、背景熒光干擾大和熒光穿透性差等問題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標記中的應用，將本發明提供的近紅外氧雜蒽類熒光染料用于血吸蟲成蟲熒光標記中，熒光染色效果好、背景熒光干擾小且熒光穿透性好。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標記中的應用，所述近紅外氧雜蒽類熒光染料具有式I所示結構：

優選地，所述應用包括以下步驟：

(1)將具有式I所示結構的近紅外氧雜蒽類熒光染料、二甲基亞砜和磷酸緩沖液混合，得到熒光染料溶液；

(2)向所述步驟(1)中熒光染料溶液中加入血吸蟲成蟲，在15～35℃下孵育5min～6h，得到標記血吸蟲成蟲；