[發(fā)明專利]一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標(biāo)記中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810136573.5
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN108344722B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳勇權(quán);曾紅;范小林;李勛;郭維
• 申請（專利權(quán)）人: 贛南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種近紅外氧雜蒽類熒光染料在血吸蟲成蟲熒光標(biāo)記中的應(yīng)用，所述近紅外氧雜蒽類熒光染料具有式I所示結(jié)構(gòu)：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將具有式I所示結(jié)構(gòu)的近紅外氧雜蒽類熒光染料、二甲基亞砜和磷酸緩沖液混合，得到熒光染料溶液；

(2)向所述步驟(1)中熒光染料溶液中加入血吸蟲成蟲，在15～35℃下孵育5min～6h，得到標(biāo)記血吸蟲成蟲；

(3)在激發(fā)波長為635nm的條件下，將所述步驟(2)中標(biāo)記血吸蟲成蟲的熒光標(biāo)記情況進(jìn)行檢測，采集650～750nm的熒光信號(hào)進(jìn)行熒光成像。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述磷酸緩沖液的pH值為7.0～7.4。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述熒光染料溶液的濃度為4～6μmol/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(1)具體為：

將具有式I所示結(jié)構(gòu)的近紅外氧雜蒽類熒光染料與二甲基亞砜混合，得到母液；

將所述母液與磷酸緩沖液混合，得到熒光染料溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述母液的濃度為0.9～1.1mmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(2)中血吸蟲成蟲的獲取方法，包括以下步驟：

將感染血吸蟲毛蚴的陽性釘螺放入清水中，在白熾燈下光照1.5～2.5h，逸出血吸蟲尾蚴；

將六周齡雌性小鼠剪去腹部體毛，用水濕潤所述小鼠的腹部皮膚，將含有45～55條所述血吸蟲尾蚴的蓋玻片貼于所述小鼠的腹部皮膚上，保持15～25min，使所述血吸蟲尾蚴穿透所述小鼠的腹部皮膚進(jìn)行感染，得到感染小鼠；

將所述感染小鼠飼養(yǎng)6～7周后，采取灌注法于所述感染小鼠的肝門-腸系膜靜脈中收集血吸蟲，將所述血吸蟲在生理鹽水中漂洗后在RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)1.5～2.5h，得到血吸蟲成蟲。