[發明專利]一種無糖基化抗PD-1單克隆抗體的純化方法

有效

• 申請號: 201810135757.X
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN110128537B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 張貴民;趙麗麗;劉增田
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種無糖基化抗PD-1單克隆抗體的純化方法，包括親和層析和病毒滅活步驟，其特征在于，具體包括以下步驟：

（1）對細胞培養液上清進行親和層析：平衡、上樣、洗滌、洗脫過程；平衡緩沖液為pH7.0-7.4含鹽的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉的緩沖液；所述洗滌過程包括三步洗滌，首先用平衡緩沖液復平衡，然后用pH8.0~8.5含鹽的Tris-鹽酸緩沖液進行洗滌，再用pH4.5~5.5甘氨酸-鹽酸緩沖液進行洗滌；洗脫緩沖液為pH2.7~3.1甘氨酸-鹽酸緩沖液；

所述的鹽為氯化鈉、氯化鉀、或氯化銨的一種；平衡緩沖液中含鹽濃度為0.15mol/L，第二步洗滌緩沖液含鹽濃度為0.15~0.5mol/L；

（2）收集上述洗脫流出液，加入蔗糖，攪拌至完全溶解；蔗糖與洗脫流出液的質量體積比為0.02~0.08:1，其中質量以g計，體積以ml計；

（3）將步驟（2）所得樣品調pH進行低pH病毒滅活。

2.根據權利要求1所述的無糖基化抗PD-1單克隆抗體的純化方法，其特征在于，所述的甘氨酸-鹽酸緩沖液替換為組氨酸-鹽酸緩沖液。

3.根據權利要求1所述的無糖基化抗PD-1單克隆抗體的純化方法，其特征在于，在親和層析和病毒滅活純化步驟后，進行離子交換層析進一步純化使得聚體含量降低到0.3%以下。