[發明專利]小麥黃條紋病毒及其NASH檢測方法、檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201810135714.1
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108315337B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 劉艷;杜真真;王錫鋒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C12Q1/70;C12Q1/6811;C12Q1/6834;C12Q1/6804;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

本發明涉及一種小麥黃條紋病毒及其NASH檢測方法、檢測試劑盒。本發明發現了一種新病毒即小麥黃條紋病毒WYSV，其全長序列如SEQ ID NO.3所示，且設計了一對特異性擴增WYSV的引物對SEQ ID NO.1/2所示，以地高辛為標記物制備DNA探針，檢測WYSV病毒。本發明還提供一種NASH檢測的WYSV病毒試劑盒，該試劑盒包括：探針PCR反應液、NASH反應試劑、硝酸纖維素膜、雜交袋、WYSV陽性對照樣品和陰性對照樣品。該檢測方法及檢測試劑盒可一次批量檢測樣品，能在短時間內低成本高效率地檢測WYSV病毒,檢測結果可靠、易于操作、特異性強、靈敏度高，耗時短，應用前景良好。

技術領域

本發明屬于農業生物學技術領域，具體地涉及一種用于小麥黃條紋病毒(Wheatyellowstriate virus，WYSV)及其NASH檢測方法、檢測試劑盒，可達到快速、靈敏、簡便地檢測植株體內WYSV的目的。

背景技術

小麥是世界各地的主要糧食作物之一。病毒病是危害小麥生產的一類重要病害，已報道的病毒病原達50多種。病毒會導致受侵染的小麥植株產生葉片失綠、植株矮化、有效分蘗減少等嚴重癥狀，對小麥生長和產量的影響巨大。許多侵染小麥的病毒由介體昆蟲特異性傳播，包括蚜蟲，灰飛虱以及葉蟬等。隨著全球氣候變暖、免耕和高毒農藥的禁用等因素使傳毒介體昆蟲群體逐漸加大，加之品種抗病性程度普遍較低等，使得蟲傳麥類作物病毒病在我國危害日趨嚴重，發生面積及為害程度迅速增長，成為影響糧食安全的重要因素之一。近年來，在我們大部分麥區危害嚴重的蟲傳病毒病有小麥黃矮病、小麥叢矮病、小麥矮縮病和小麥綠矮病等多種，其中小麥黃矮病的病原為大麥黃矮病毒(Barley yellowdwarf virus,BYDV)，由麥蚜傳播特異性傳播。小麥叢矮病由北方禾谷花葉病毒(Northerncereal mosaic virus，NCMV)引起，小麥綠矮病由水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)引起,這兩種病毒均由灰飛虱(Laodelphax striatellusFallen)傳播。小麥矮縮病的病原是小麥矮縮病毒(Wheat dwarf virus,WDV)，主要通過介體條沙葉蟬(Psammotettix striatus L.)以持久循回方式傳播的。而大麥黃條點花葉病是近幾年在我國小麥上發現的由灰飛虱傳播的另一種病毒，病原為大麥黃條點花葉病毒(Barley yellow striate mosaic virus,BYSMV)，是一種細胞質彈狀病毒。

2016年本發明人在陜西韓城進行病害田間調查時發現了一種新的病害癥狀，與小麥矮縮病毒病產生的癥狀不同，受侵染的小麥無明顯矮化，表現為嚴重黃化、發病葉片沿葉脈失綠，逐漸發展為從葉尖開始干枯，最后枯死(圖1)。經觀察發現發病田塊兒主要的農業害蟲為異沙葉蟬(Psammotettix alienus Linnaeus)，將異沙葉蟬捕回飼養到健康小麥植株上，3周后小麥植株出現了與田間相似的病癥，初步證明該病毒病是由異沙葉蟬傳播的，很可能是一種還未公開的新病毒。因此有必要對該病毒進行鑒定，檢測。