[發明專利]一種磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒

在審

• 申請號: 201810135472.6
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108333371A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 李根平
• 申請（專利權）人: 廣州源起健康科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所 44229
• 代理人: 姜若天

1.一種磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于包括包被NGAL單克隆抗體的免疫磁珠、NGAL校準品溶液、銪標記的NGAL單克隆抗體溶液、清洗液和增強液。

2.如權利要求1所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述的包被NGAL單克隆抗體的免疫磁珠為帶有官能團修飾的直徑1~3μm的超順磁珠與NGAL單克隆抗體共價偶聯物，其中所使用的磁珠為羧基磁珠、氨基磁珠、羥基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、鏈酶親和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、親水磁珠、疏水磁珠中的一種或幾種。

3.如權利要求1所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述的免疫磁珠的制備方法為：吸取羧基磁珠到離心管中，將離心管放置在磁力架中，利用磁力架進行磁珠和緩沖液的分離，用0.05M pH6.0的2-（N-嗎啡啉）乙磺酸洗滌磁珠3~5次；向上述洗滌好的磁珠中加入0.05M pH6.0的2-（N-嗎啡啉）乙磺酸，加入20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸溶液和20mg/mL N-羥基琥珀酰亞胺，室溫震蕩反應；將活化好的磁珠置于磁力架上，棄上清，收集活化好的磁珠；加入單克隆抗體，室溫持續旋轉孵育3~5小時；上述磁珠置于磁力架上，棄上清，收集免疫磁珠。

4.如權利要求3所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述的免疫磁珠還加入含有2%BSA 0.1M pH 8.0的Tris-HCl緩沖液，重懸磁珠，封閉未偶聯單克隆抗體的活化羧基位點，反應30~60分鐘。

5.如權利要求4所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述免疫磁珠置于磁力架上，棄上清，加入免疫磁珠保存液；所述的保存液為含5%（w/v） BSA，1%（w/v）海藻糖，0.1%（v/v）Tween-20 0.05M pH 8.0的Tris-HCl緩沖液。

6.如權利要求1所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述的銪標記的NGAL單克隆抗體溶液的制備方法為：按照NGAL抗體與Eu³⁺的質量比為5:1，將DTTA-Eu作為標記物，在0.05M pH8.5的碳酸鹽緩沖液下，加入DTTA-Eu與NGAL單克隆抗體，混合后溶于0.05M pH8.5的碳酸鹽緩沖液，室溫震蕩過夜；用葡聚糖凝膠柱純化后收集峰管；將上述制備好的銪標抗體稀釋，使NGAL抗體的終濃度為0.0045~0.0080g/L。

7.如權利要求1所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述清洗液的配方為：0 .8~1 .5% Tween-20，0.02%Proclin300，pH 7.2~7.5 0.01M Tris-HCl緩沖液。

8.如權利要求1所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述增強液的配方為：0.03%乙酸鈉、0.0002~0.0009%β-NTA、0.0024% TOPO 、0.08%醋酸、0.1%無水乙醇、0.01%的Triton X-100的水溶液。

9.如權利要求1所述的磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測NGAL試劑盒，其特征在于，所述NGAL校準品的制備方法為：用含1.5% Tween-20，0.02%Proclin300，pH 7.5 0.02M Tris-Hcl緩沖液將NGAL抗原稀釋至0、10、100、500、1000、1500ng/ml。