[發明專利]一種牛卵母細胞體外成熟培養液及培養方法有效
| 申請號： | 201810134698.4 | 申請日： | 2018-02-09 |
| 公開（公告）號： | CN108103011B | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 張景程;張涌;馬曉楠;張敏;王勇勝 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12N5/075 | 分類號： | C12N5/075 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 712100 陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 卵母 成熟培養液 培養液 體外受精胚胎 體細胞核移植 細胞體外培養 成熟培養 胚胎發育 胎牛血清 雌二醇 囊胚 發育 成熟 | ||
1.一種牛卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于：該體外成熟培養液由體積分數5～20％的胎牛血清、5～20mg/L的胰島素、2.8～11.0mg/L的轉鐵蛋白、0.05～0.1IU/mL的HMG、0.5～1.5μg/mL的17β-雌二醇、5～10ng/mL的EGF、1.1～3.3mg/mL的bFGF和10～100ng/mL的CXCL12，以及無Hepes的M199基礎培養液組成。
2.根據權利要求1所述一種牛卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于：所述體外成熟培養液由體積分數10％的胎牛血清、10mg/L的胰島素、5.5mg/L的轉鐵蛋白、0.075IU/mL的HMG、1μg/mL的17β-雌二醇、10ng/mL的EGF、2.2mg/mL的bFGF和50ng/mL的CXCL12，以及無Hepes的M199基礎培養液組成。
3.一種牛卵母細胞體外成熟培養方法，其特征在于：包括以下步驟：
將GV期牛卵母細胞放入預熱1～3小時的卵母細胞體外成熟培養液中，然后置于培養箱中培養20～22小時，即獲得成熟的卵母細胞；所述預熱和培養于38.5℃、5％CO2及飽和濕度的培養箱中進行；每400～600μL的卵母細胞體外成熟培養液中放入30～50枚牛卵母細胞；所述卵母細胞體外成熟培養液由體積分數5～20％的胎牛血清、5～20mg/L的胰島素、2.8～11.0mg/L的轉鐵蛋白、0.05～0.1IU/mL的HMG、0.5～1.5μg/mL的17β-雌二醇、5～10ng/mL的EGF、1.1～3.3mg/mL的bFGF和10～100ng/mL的CXCL12，以及無Hepes的M199基礎培養液組成。
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