[發明專利]牙髓間充質干細胞阻斷性治療膝關節骨關節炎的方法

在審

• 申請號: 201810134695.0
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108042568A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 李軍
• 申請（專利權）人: 卡替（上海）生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種牙髓間充質干細胞阻斷性治療膝關節骨關節炎的方法，其特征在于：所述牙髓間充質干細胞阻斷性治療膝關節骨關節炎的方法采用完全弗氏佐劑CFA與碘醋酸鈉MIA通過關節腔注射，經過1周時間的誘導，獲得膝關節骨關節炎的大鼠模型；1周后，對不同分組的大鼠進行干預治療，其中治療組使用DPSCs細胞懸液關節腔原位注射或者靜脈注射的方式進行阻斷性治療；治療4周后取材對治療效果進行分析，以評估DPSCs對膝關節骨關節炎的治療效果。

2.根據權利要求1所述的牙髓間充質干細胞阻斷性治療膝關節骨關節炎的方法，其特征在于：所述牙髓間充質干細胞阻斷性治療膝關節骨關節炎的方法具體包括如下步驟：

1）DPSC培養及注射液制備：

復蘇P2代DPSCs種子庫細胞，培養基成分為90％的α-MEM和10％ FBS，匯合率至90％時進行傳代，收獲P4細胞進行實驗；收獲P4代細胞，經過洗滌后，進行計數，根據計數結果用生理鹽水調整密度為4×106/ml，細胞注射液在使用前保存在冰上，并在2h內使用；

2）膝關節骨關節炎大鼠模型誘導：

CFA與20 mg/ml的MIA按體積比1:1混合，配置成每50μl含25μg CFA與0.5 mg MIA的CFA+MIA混合液；

選用8周齡的大鼠，于膝關節腔內注射50μl CFA+MIA混合液，誘導膝關節骨關節炎，誘導時間為1周；

3）阻斷性治療干預：

膝關節骨關節炎誘導1周后，局部治療組在關節腔內注射50μl含有2×105個DPSCs的細胞懸液；全身治療組通過尾靜脈注射500μl含有2×106個DPSCs的細胞懸液；正常組和炎癥組分別注射相同量的生理鹽水，4周后評估DPSCs對膝關節骨關節炎的治療作用；

4）Micro-CT觀察：

第5周，對大鼠安樂死后，解剖收集大鼠膝關節標本，收集大鼠膝關節標本進行組織切片染色，將關節頭和關節窩拆開分別進行Micro-CT掃描，對掃描結果校準后，對100個層面建立三維圖像，計算骨礦密度，并進行統計分析；

5）組織學觀察：

取材后將關節腔部分立即浸入10％多聚甲醛溶液，pH7.2-7.4，固定1周，經過梯度乙醇脫水、二甲苯透明處理、石蠟包埋、骨關節處縱切面5um連續切片、HE或Masson染色和透明后中性樹膠封皮，在顯微鏡下觀察拍照；

6）統計：

結果均采用均值±標準差表示，用SPSS21.0進行統計分析，根據需要進行t檢測分析，P<0.05表示具有顯著差異。