[發明專利]一種雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒

在審

• 申請號: 201810134340.1
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108398563A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 李根平
• 申請（專利權）人: 廣州源起健康科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所 44229
• 代理人: 姜若天

本發明公開了一種雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H?FABP試劑盒，包括包被cTnI單克隆抗體的免疫磁珠、包被H?FABP單克隆抗體的免疫磁珠、cTnI和H?FABP的校準品溶液、銪標記的cTnI單克隆抗體溶液和釤標記的H?FABP單克隆抗體溶液、清洗液和增強液。所述的包被cTnI和H?FABP免疫磁珠為帶有官能團修飾的直徑1~3μm的超順磁珠分別與cTnI、H?FABP的抗體共價偶聯物。本發明的靈敏度高，cTnI的靈敏度為0.05ng/mL，H?FABP的靈敏度為1ng/mL，血清(漿)樣本不需要稀釋；檢測時間短，30min出報告；樣品需求量少，一次上樣只需100μL；配套全自動時間分辨免疫分析儀，操作簡單，節省人力。

技術領域

本發明涉及體外試劑檢測技術領域，具體地說，本發明涉及一種雙標記時間分辨熒光免疫磁微粒定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒。

背景技術

急性心梗(acute myocardial infarction，AMI)近年來在世界范圍內發病持續升高，而對AMI的治療，再灌注治療的效果與時間呈顯著負相關，早期發現AMI對及時、正確治療非常關鍵。目前常用診斷AMI的生化指標有肌紅蛋白(myoglobin，MYO)、肌鈣蛋白(troponin I，cTnI或troponin T，cTnT)和肌酸激酶同工酶(creatine kinasemass，CK-MB)。這些指標對早期診斷AMI的靈敏度或特異性都存在一定的缺陷，MYO半衰期短，峰值到達早，但是特異性差容易受到干擾，得到假陽性的檢查結果；CK-MB特異性比較好，但是半衰期相對MYO長，需要更長的時間才能反饋病情，延遲醫生的診斷和治療。cTnI是目前診斷心肌梗死的金標準，但cTnI在心肌受損時釋放入血的時間晚，一般也要發病6h后才具備診斷價值。對于AMI患者來講，時間就是生命，為了實現對胸痛患者的早期識別并進行危險分層，我們需要更快提供準確結果的檢測儀器以及更快的心肌損傷早期診斷標志物。

心臟型脂肪酸結合蛋白(heart fatty acid-binding protein，H-FABP)是一種新型的心肌標志物，也是目前國內外研究較多的早期診斷AMI敏感高、特異性高的生化指標。在心肌細胞損傷后，H-FABP可先于心肌肌鈣蛋白，迅速被釋放進入血液循環。最早在AMI發病后30分鐘后，血漿中H-FABP就可被檢測到。因此，聯合檢測H-FABP、cTnI，使H-FABP、cTnI診斷的時間窗口期互補，彌補單項檢測的不足，將大大提高AMI診斷率，在AMI早期診斷、療效觀察和預后判斷中發揮越來越重要的作用。

為此，本發明將雙標記時間分辨熒光免疫分析技術與磁微粒相結合，提供了一種基于磁微粒的雙標記時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法和檢測方法，不僅能夠同時檢測樣品中的H-FABP和cTnI含量，而且還保證檢測結果更加準確可靠，具有更高的檢測靈敏度和特異性，并達到了較佳的性能參數。

發明內容

本發明的目的是提供一種成本低廉、操作簡單、準確、靈敏的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒。

為實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，包括：包被cTnI單克隆抗體的免疫磁珠、包被H-FABP單克隆抗體的免疫磁珠、cTnI和H-FABP的校準品溶液、銪標記的cTnI單克隆抗體溶液和釤標記的H-FABP單克隆抗體溶液、清洗液和增強液。

在上述雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒中，所述的包被cTnI和H-FABP免疫磁珠為帶有官能團修飾的直徑1～3μm的超順磁珠分別與cTnI、H-FABP的抗體共價偶聯物，其中所使用的磁珠為羧基磁珠、氨基磁珠、羥基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、鏈酶親和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、親水磁珠、疏水磁珠中的一種或幾種。