[發(fā)明專利]一種雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810134340.1
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108398563A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發(fā)明（設計）人: 李根平
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州源起健康科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所 44229
• 代理人: 姜若天

1.一種雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于包括：包被cTnI單克隆抗體的免疫磁珠、包被H-FABP單克隆抗體的免疫磁珠、cTnI和H-FABP的校準品溶液、銪標記的cTnI單克隆抗體溶液和釤標記的H-FABP單克隆抗體溶液、清洗液和增強液。

2.如權(quán)利要求1所述的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于，所述的包被cTnI和H-FABP免疫磁珠為帶有官能團修飾的直徑1~3μm的超順磁珠分別與cTnI、H-FABP的抗體共價偶聯(lián)物，其中所使用的磁珠為羧基磁珠、氨基磁珠、羥基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、鏈酶親和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、親水磁珠、疏水磁珠中的一種或幾種。

3.如權(quán)利要求1所述的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于，所述包被cTnI單克隆抗體的免疫磁珠的制備方法為：吸取羧基磁珠到離心管中，將離心管放置在磁力架中，利用磁力架進行磁珠和緩沖液的分離，用0.1M pH6.0的2-（N-嗎啡啉）乙磺酸洗滌磁珠3~5次；向上述洗滌好的磁珠中加入0.1M pH6.0的2-（N-嗎啡啉）乙磺酸，加入20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸溶液和20mg/ml N-羥基琥珀酰亞胺，室溫震蕩反應；將活化好的磁珠置于磁力架上，棄上清，收集活化好的磁珠；加入單克隆抗體，室溫持續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育3~5小時；上述磁珠置于磁力架上，棄上清，收集免疫磁珠；加入含有5%BSA 0.1M pH 8.0的Tris-HCl緩沖液，重懸磁珠，封閉未偶聯(lián)單克隆抗體的活化羧基位點，反應30~60分鐘；上述磁珠置于磁力架上，棄上清，加入免疫磁珠保存液。

4.如權(quán)利要求3所述的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于，所述的保存液為含5%（w/v） BSA，10% （w/v）海藻糖，0.1%（v/v）Tween-20的0.05M pH 8.0的Tris-HCl緩沖液。

5.如權(quán)利要求1所述的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于，所述包被H-FABP單克隆抗體的免疫磁珠的制備方法為：吸取羧基磁珠到離心管中，將離心管放置在磁力架中，利用磁力架進行磁珠和緩沖液的分離，用1ml 0.1M pH5.0的2-（N-嗎啡啉）乙磺酸洗滌磁珠3~5次；向上述洗滌好的磁珠中加入1ml 0.1M pH5.0的2-（N-嗎啡啉）乙磺酸，加入10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸溶液和30mg/ml N-羥基琥珀酰亞胺，室溫震蕩反應；將活化好的磁珠置于磁力架上，棄上清，收集活化好的磁珠；加入單克隆抗體，室溫持續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育5~8小時；上述磁珠置于磁力架上，棄上清，收集免疫磁珠；加入含有5%BSA 0.05M pH 8.0的Tris-HCl緩沖液，重懸磁珠，封閉未偶聯(lián)單克隆抗體的活化羧基位點，反應30~60min；上述磁珠置于磁力架上，棄上清，加入免疫磁珠保存液。

6.如權(quán)利要求5所述的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于，所述的保存液為含8%（w/v） BSA，5% （w/v）蔗糖，0.5%（v/v）Tween-20的0.05MpH 8.0的Tris-HCl緩沖液。

7.如權(quán)利要求1所述的雙標記磁珠時間分辨熒光免疫定量檢測cTnI和H-FABP試劑盒，其特征在于，所述的銪標記的cTnI單克隆抗體溶液中，cTnI抗體與Eu³⁺的質(zhì)量比為5:1； 所述的釤標記的H-FABP單克隆抗體溶液中，H-FABP抗體與Sm³⁺的質(zhì)量比為2:1。