[發明專利]一種融合蛋白及治療非小細胞肺癌的重組病毒疫苗和制備方法

有效

• 申請號: 201810132503.2
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108440669B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 焦順昌;張嶸;林童俊
• 申請（專利權）人: 焦順昌;北京鼎成肽源生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N7/01;A61K39/00;A61P35/00;C12R1/93
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本發明提供了一種融合蛋白及治療非小細胞肺癌的病毒疫苗和制備方法，本發明屬于疫苗技術領域。本發明提供了一種融合蛋白，包括黏蛋白1(MUC1)抗原元件和黑素瘤抗原家族A3(MAGE?A3)抗原元件和位于黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件之間的連接肽；所述連接肽的氨基酸個數為0～20個。所述融合蛋白具有兩者的生物學功能，既具有黏蛋白1的免疫原性，又具有黑素瘤抗原家族A3的免疫原性，且所述融合蛋白質可以在兩種抗原元件的協同下增強抗腫瘤的效果，維持周期長，免疫宿主廣泛，不需要添加佐劑為抗腫瘤等治療提供新方向。

技術領域

本發明屬于疫苗技術領域，具體涉及一種融合蛋白及治療非小細胞肺癌的病毒疫苗和制備方法。

背景技術

非小細胞肺癌，屬于肺癌的一種，它包括鱗癌、腺癌、大細胞癌，與小細胞癌相比，其癌細胞生長分裂較慢，擴散轉移相對較晚。非小細胞肺癌約占肺癌總敉的80～85％。臨床上非小細胞肺癌的癥狀表現發熱、胸痛、氣促、咳嗽、血痰等。很多人都會因為不了解該病初始癥狀的具體情況而出現誤診，尤其是咳嗽，該癥狀主要是由于肺部的惡性腫瘤細胞，也即癌細胞持續的刺激患者的呼吸道引發的。

目前，手術、化療、放療等傳統療法對于早期非小細胞肺癌具有一定的療效，但一方面化療、放療具有較大的副作用，另一方面由于許多腫瘤發現較晚，往往失去手術治療的最佳機會，所以通過增強機體免疫系統的抗腫瘤作用殺滅腫瘤細胞、達到治療腫瘤目的的免疫與基因療法作為腫瘤治療的一種新模式，成為腫瘤治療和免疫學研究的熱點。

MAGE基因的表達產物中MAGE-3蛋白是腫瘤特異性抗原的典型代表。MAGE-3是廣泛存在于多種腫瘤的腫瘤特異性抗原，在正常組織中除了胎盤和睪丸低水平表達外，在其他正常成熟組織均不表達，而睪丸是免疫豁免器官，所以，MAGE-3是一種理想的腫瘤相關抗原，可以作為多種腫瘤免疫治療的靶點。但是MAGE-3作為非小細胞肺癌抗原制備疫苗，由于抗原肽的表位有限，不能包括所有的免疫位點、人工合成的抗原肽的空間結構可能與自然產生的抗原空間結構不同，妨礙產生正常的免疫反應或存在免疫性較低的問題，大大影響免疫治療。

盡管現有技術中常常采用兩種細胞抗原融合得到融合蛋白，但是融合蛋白在體外致敏DC的效率一般較低，DC在攝取分子肽后，往往不能有效遞呈抗原并激發特異性的CTL，因此如何增強DC對抗原的加工遞呈，以期更有效地激發腫瘤抗原特異性的免疫應答仍然是腫瘤免疫治療研究中亟待解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種融合蛋白及治療非小細胞肺癌的重組病毒疫苗和制備方法，使所述融合蛋白具有較強的免疫性。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種融合蛋白，包括黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件；所述黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件之間還包括連接肽；所述連接肽的氨基酸個數為0～20個。

優選的，所述黏蛋白1抗原元件具有如序列表中SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；所述黑素瘤抗原家族A3抗原元件具有如序列表中SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；

所述連接肽具有如序列表中SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

優選的，所述融合蛋白具有如序列表中SEQ ID No.4或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。

本發明提供了一種融合蛋白的編碼基因，編碼所述的融合蛋白。

優選的，所述編碼基因具有如序列表中SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或具有如序列表中SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列。

本發明提供了一種治療非小細胞肺癌的重組病毒疫苗的構建方法，包括以下步驟：

1)將所述的編碼基因克隆到穿梭質粒中，得到重組穿梭質粒；