[發(fā)明專利]一種融合蛋白及治療非小細(xì)胞肺癌的重組病毒疫苗和制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810132503.2
• 申請(qǐng)日: 2018-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN108440669B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 焦順昌;張嶸;林童俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 焦順昌;北京鼎成肽源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N7/01;A61K39/00;A61P35/00;C12R1/93
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1.一種融合蛋白，其特征在于，由黏蛋白1抗原元件、連接肽和黑素瘤抗原家族A3抗原元件組成；

所述黏蛋白1抗原元件和黑素瘤抗原家族A3抗原元件之間為連接肽；所述連接肽的氨基酸個(gè)數(shù)為0～20個(gè)；

所述黏蛋白1抗原元件的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；所述黑素瘤抗原家族A3抗原元件的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4所示。

3.一種融合蛋白的編碼基因，其特征在于，編碼權(quán)利要求1所述的融合蛋白。

4.一種治療非小細(xì)胞肺癌的重組病毒疫苗的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將權(quán)利要求3所述的編碼基因克隆到穿梭質(zhì)粒中，得到重組穿梭質(zhì)粒；

2)用MVA病毒感染細(xì)胞，培養(yǎng)90～120min，得到感染細(xì)胞；

3)將所述重組穿梭質(zhì)粒與所述感染細(xì)胞混合，37℃培養(yǎng)24～48h，得到單層細(xì)胞；

4)反復(fù)凍融所述單層細(xì)胞2～3次，將凍融的細(xì)胞破碎處理2～5次，固液分離，得到上清液；

5)將所述上清液接種細(xì)胞，培養(yǎng)，將得到的病變細(xì)胞破碎、分離上清液，得到用于治療非小細(xì)胞肺癌的重組病毒疫苗。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟2)中培養(yǎng)的時(shí)間為100min。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟1)的穿梭質(zhì)粒為pIIIdHRP7.5。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟3)中培養(yǎng)的時(shí)間為36h。

8.權(quán)利要求4～7任意一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法得到的重組病毒疫苗，其特征在于，包括權(quán)利要求3所述的融合蛋白的編碼基因。