[發明專利]一種靶向微泡及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201810131940.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108452328A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 孫啟全
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第三醫院
• 主分類號: A61K49/22
• 分類號: A61K49/22;A61K47/42;G06F19/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明提供了一種靶向微泡，包括由外殼和外殼內包裹的氣體組成的微泡，所述外殼上連接有C4d抗體或C3d抗體。采用本發明靶向微泡做造影劑，對腎臟和心臟移植物中沉積的C4d或C3d進行超聲顯像，通過定性與定量分析，可以準確地診斷AMR的發生。

技術領域

本發明涉及一種靶向微泡及其制備方法和用途。

背景技術

腎臟移植和心臟移植是腎功能衰竭和心功能衰竭患者的最佳治療方法。近年來由于新型免疫抑制劑的出現，T細胞介導的排斥發生率顯著降低，受體短期生存率明顯改善。然而，抗體介導的排斥(antibody-mediated rejection,AMR)成為影響移植物存活的主要因素。據報道，目前移植腎的10年存活率不足50％，其中60％以上的移植腎失功是AMR導致的。同樣，在心臟移植中，AMR的發生率高達10-20％，發生AMR后會大大增加移物失功的概率。

C4d是補體激活經典途徑中C4b的裂解產物，可與血管中的內皮細胞表面共價結合。當發生AMR的時候，抗原-抗體復合物可激活補體系統，產生大量C4d。C4d在AMR中具有很高的特異性，盡管也有一部分C4d陰性AMR的報道及研究，但目前其仍然是診斷AMR最好的單一標志物。目前C4d常用的檢測方法是對組織活檢的標本進行免疫組化和免疫熒光染色，再對染色結果進行半定量分析。而組織標本的獲取是有創性的，像常用的細針穿刺活檢就有可能導致嚴重的并發癥。并且因為穿刺活檢取材部位的局限性，有時并不能完全體現整個器官的組織改變，這種抽樣誤差難免會對診斷的結果產生影響。因此，如果有一種無創的方法能對C4d進行全定量的檢測，將能讓我們在AMR發生的時候，掌握更全面，精確的資料。

在使用了造影劑增強與周圍組織的對比度后，相對于普通超聲，超聲造影具有很好的靈敏度和特異度；而新近的靶向超聲(targeted ultrasound)顯像不但結合了前者的優勢，并且能更進一步檢測到細胞和分子水平的生物活動。超聲造影在疾病診斷的價值以及其安全性早已在多年的臨床工作中得到證實，而針對血管內皮細胞生長因子2(vascularendothelial growth factor receptor 2，VEGFR2)設計的靶向微泡，被應用于觀察各腫瘤組織中新生血管的形成，并進入了臨床試驗階段。靶向超聲的原理首先是基于微泡的基本結構，由表面的磷脂將氣體包裹在內，從而在體內達到增強造影的效果。其次再通過固定在微泡表面的配體，使微泡到達待觀察組織后，與組織中存在的標志物完成特異性結合，使微泡達到靶向的作用效果。在完成超聲顯像的過程中，還可以通過設定破壞-補償的模式(Schematic diagram)實現對靶向微泡的定量檢測。目前在與移植物排斥相關的靶向超聲的研究中，有人用針對細胞間粘附因子(intracellular adhesion molecule-1，ICAM-1)以及T淋巴細胞(CD3,CD4和CD8)的靶向微泡被用于診斷細胞介導的急性排斥，而以上研究并未解決AMR的診斷問題。考慮到在AMR發生的過程中，C4d在腎臟以及心臟的毛細血管內皮細胞表面廣泛表達，可作為AMR靶向超聲無創性檢測的設計靶點。

發明內容

本發明在大鼠模型中，研究了用靶向結合C4d的微泡做造影劑，對腎臟和心臟移植物中沉積的C4d進行超聲顯像，通過定性與定量分析，準確地診斷急性AMR的發生。在此基礎上，提供一種靶向微泡及其制備方法和用途。

為實現上述目的，本發明所采取的技術方案：一種靶向微泡，包括由外殼和外殼內包裹的氣體組成的微泡，所述外殼上連接有C4d抗體或C3d抗體。

優選地，所述外殼表面被覆有鏈霉親和素，所述C4d抗體為生物素標記的C4d抗體。

優選地，所述外殼表面被覆有鏈霉親和素，所述C3d抗體為生物素標記的C3d抗體。

優選地，所述C4d抗體或C3d抗體為熒光染料標記的抗體。

優選地，所述靶向微泡的直徑為1μm-10μm。