[發(fā)明專利]一種去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810131774.6
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108676829A
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發(fā)明（設計）人: 孫明波;梁疆莉;高娜;顧琴;姬秋彥;馬艷;李琦涵;史茘;楊凈思;姚宇峰;楊曉蕾;車艷春;衡燮;和占龍;趙剛
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K1/18;C07K1/14;C12R1/01
• 代理公司: 北京國林貿(mào)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11001
• 代理人: 鄭俊彥;許文娟

1.一種去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1）將百日咳桿菌發(fā)酵液離心，收集上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，再經(jīng)超濾濃縮得到發(fā)酵上清，用含尿素的磷酸平衡緩沖液調(diào)節(jié)發(fā)酵上清的pH和電導，調(diào)整后樣品上樣于Capto SPImpRes柱中，洗脫并分別收集PT組分和FHA組分；

2）將步驟1）得到的PT組分繼續(xù)上樣于Capto MMC柱，洗脫得到進一步純化后的PT組分；

3）用含尿素的磷酸平衡緩沖液調(diào)節(jié)步驟2）收集的進一步純化后的PT組分和步驟1）收集的FHA組分的pH和電導，而后分別上樣于Captoadhere柱中洗脫，通過層析純化去除內(nèi)毒素，收集樣品穿透峰，即得到目的蛋白PT和FHA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法，其特征在于，所述含尿素的磷酸平衡緩沖液為尿素濃度為1.5~2.5 mol/L的磷酸平衡緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法，其特征在于，步驟1）中所述發(fā)酵上清上樣前調(diào)至pH5.0~6.0、電導<8ms/cm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法，其特征在于，步驟1）中所述的洗脫是分別用含0.11 mol/L、0.15 mol/L和0.35 mol/L NaCl 的洗脫液洗脫。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法，其特征在于，步驟2）中所述的洗脫是用Tris-HCl緩沖液進行洗脫。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除無細胞百日咳組分疫苗中內(nèi)毒素的方法，其特征在于，步驟3）中所述步驟2）收集的進一步純化后的PT組分和步驟1）收集的FHA上樣前調(diào)節(jié)至pH5.3~6.3、電導10~18ms/cm。

7.一種去除內(nèi)毒素的百日咳毒素，其特征在于，所述去除內(nèi)毒素的百日咳毒素由權(quán)利要求1-6任一項所述方法制備得到。

8.一種去除內(nèi)毒素的絲狀凝血素，其特征在于，所述去除內(nèi)毒素的絲狀凝血素由權(quán)利要求1-6任一項所述方法制備得到。