[發明專利]血清淀粉樣蛋白A1突變體及其制備方法和應用

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• 申請號: 201810131438.1
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108299551A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 陳慶全;封冰;張明程
• 申請（專利權）人: 北京市華信行生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/569
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本發明公開了一種血清淀粉樣蛋白A1突變體，該突變體具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列，或者該突變體具有將SEQ ID No:1所示的氨基酸序列經過一個或者幾個氨基酸殘基的取代、缺失或者添加后仍具有血清淀粉樣蛋白A1的活性不變的氨基酸序列，或者在SEQ ID NO:1的氨基末端和/或羧基末端連接有標簽的氨基酸序列的蛋白質；其中所述突變體SEQ ID No:1的氨基酸序列相對于原始血清淀粉樣蛋白A1的第111位天冬酰胺為缺失。通過定點突變，對SAA1的氨基酸序列第117位天冬酰胺進行了敲除設計，構建了一種SAA1突變體，在保留原有抗原活性的同時大大提高了SAA1的穩定性，為SAA1作為免疫原或者標準品在免疫學測定中奠定基礎。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及一種血清淀粉樣蛋白A1突變體及其制備方法和應用。

背景技術

血清淀粉樣蛋白A(Serum Amyloid A,SAA)是機體受到感染和損傷時分泌的一種主要的急性期蛋白，是組織淀粉樣蛋白A的前體物質。SAA是一類多基因編碼的多形態蛋白的總稱，代表一個相對分子質量為12000的家族，由相關但各具獨立基因的蛋白(SAA1-SAA4)組成。其中，人血清淀粉樣蛋白A1(hSAA1)主要由肝細胞合成，人SAA2與人SAA1有7個氨基酸的差別，它們均為急性期蛋白，在炎癥反應中作用相近。

與SAA1類似，C-反應蛋白(CRP)的濃度也是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標，細菌感染時二者濃度升高相平行，病毒感染時，SAA1濃度上升，而CRP的血清濃度幾乎不升高或者升高不明顯。在感染性疾病中，SAA1的絕對上升要高于CRP，因此SAA1測定，尤其對微小急性相反應可提供更好的鑒別。在臨床上對SAA1在病人血清中含量的檢測具有輔助診斷價值。

作為感染性疾病的初篩，SAA1檢測已經在很多醫院開展，市場上已經出現不同方法的檢測試劑盒，采用的方法為雙抗體夾心法測定SAA1濃度。上述方法中必須以SAA1抗原制備梯度濃度的標準品推算樣本中SAA1濃度和SAA1作為免疫原制備抗SAA1抗體。而目前市面所售SAA1蛋白常規條件下存在不穩定、易降解等問題，極大地影響檢測結果的穩定性，因此，獲得一種高穩定的SAA1具有重要的應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種SAA1突變體，所述SAA1突變體通過對原始SAA1基因進行定點突變獲得，與已報道的SAA1蛋白存在一個堿基位點的不同，從而導致該SAA1突變體在保持原有抗原活性的同時，增強了穩定性，從而解決了現有SAA1不穩定易降解的缺陷。

本發明提供了一種血清淀粉樣蛋白A1突變體，該突變體具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列，或者該突變體具有將SEQ ID No:1所示的氨基酸序列經過一個或者幾個氨基酸殘基的取代、缺失或者添加后仍具有血清淀粉樣蛋白A1的活性不變的氨基酸序列，或者在SEQ ID NO:1的氨基末端和/或羧基末端連接有標簽的氨基酸序列的蛋白質；其中所述突變體SEQ ID No:1的氨基酸序列相對于原始血清淀粉樣蛋白A1的第117位天冬酰胺為缺失。

優選地，該突變體具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。

本發明還提供了一種編碼血清淀粉樣蛋白A1突變體的基因，所述基因具有SEQ IDNo:2所示的核苷酸序列，或者所述基因具有編碼SEQ ID No:1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

優選地，該基因具有SEQ ID No:2所示的核苷酸序列。

本發明還提供了一種重組載體，所述重組載體含有所述的基因。

本發明還提供了一種重組菌株，所述重組菌株上述的重組載體。

本發明還提供了一種血清淀粉樣蛋白A1突變體的制備方法，包括以下步驟：