[發明專利]血清淀粉樣蛋白A1突變體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810131438.1
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN108299551A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 陳慶全;封冰;張明程
• 申請（專利權）人: 北京市華信行生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/569
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1.一種血清淀粉樣蛋白A1突變體，其特征在于，該突變體具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列，或者該突變體具有將SEQ ID No:1所示的氨基酸序列經過一個或者幾個氨基酸殘基的取代、缺失或者添加后仍具有血清淀粉樣蛋白A1的活性不變的氨基酸序列，或者在SEQID NO:1的氨基末端和/或羧基末端連接有標簽的氨基酸序列的蛋白質；其中所述突變體SEQ ID No:1的氨基酸序列相對于原始血清淀粉樣蛋白A1的第117位天冬酰胺為缺失。

2.根據權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述突變體具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。

3.一種編碼血清淀粉樣蛋白A1突變體的基因，其特征在于，所述基因具有SEQ ID No:2所示的核苷酸序列，或者所述基因具有編碼SEQ ID No:1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于，所述基因具有SEQ ID No:2所示的核苷酸序列。

5.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體含有如權利要求3或4所述的基因。

6.一種重組菌株，其特征在于，所述重組菌株含有權利要求5所述的重組載體。

7.一種血清淀粉樣蛋白A1突變體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.血清淀粉樣蛋白A1突變體的氨基酸序列的設計：將NCBI網站公布的人類血清淀粉樣蛋白A1的SEQ ID No:3所示的氨基酸序列的第117位天冬酰胺突變為缺失得到SEQ ID No:1所示的氨基酸序列；

b.血清淀粉樣蛋白A1突變體基因的優化和獲得：采用大腸桿菌優勢密碼子對NCBI網站公布的人類血清淀粉樣蛋白A1的核苷酸序列進行人工優化，得到SEQ ID NO:2所示核苷酸序列，通過退火延伸PCR技術，獲得由大腸桿菌優勢密碼子組成的血清淀粉樣蛋白A1突變體的基因；

c.血清淀粉樣蛋白A1突變體表達載體的構建：將步驟(b)中獲得的血清淀粉樣蛋白A1突變體基因序列用NheI和XhoI進行雙酶切，與同樣經過NheI和XhoI雙酶切的pET-30a(+)載體進行連接，得到表達載體；

d.血清淀粉樣蛋白A1突變體的表達純化：將步驟(c)中獲得表達載體轉化大腸桿菌BL-21感受態細胞，得到SAA1突變體表達菌株，進行培養、誘導表達以及純化，最終獲得所述血清淀粉樣蛋白A1突變體。

8.由權利要求7所述方法制備的血清淀粉樣蛋白A1突變體。

9.權利要求1所述的血清淀粉樣蛋白A1突變體在檢測感染性疾病的早期炎癥中的應用。