[發明專利]一種原野庫蠓的特異基因及其分子鑒定方法

在審

• 申請號: 201810130954.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108342398A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 陳海嬰;劉仰青;陶卉英;馬紅梅;柳小青
• 申請（專利權）人: 南昌市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/11;C12Q1/6888;C12Q1/686
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 覃婧嬋

本發明公開了一種原野庫蠓的特異基因及其分子鑒定方法，其特征在于采用分子生物學方法獲取該庫蠓的COI基因序列，通過基因序列相似性的比對，對該庫蠓進行種類鑒定。本發明提供的原野庫蠓分子鑒定方法，有利于實現原野庫蠓準確、快速的鑒定。

技術領域

本發明涉及本發明涉及物種鑒定領域，特別涉及原野庫蠓的特異基因及其分子鑒定方法。

背景技術

吸血庫蠓是一類微小型昆蟲，可傳播和攜帶藍舌病、絲蟲病、奧羅普切病毒、西尼羅河病病原體，是重要的醫學昆蟲之一。近年來，隨著全球氣候變暖，在一定程度上使庫蠓傳播蟲媒病病毒的能力提高，也使媒介庫蠓的分布范圍向地球兩極和高海拔地區擴大，庫蠓種群傳播蟲媒病毒給動物群的能力增加，一些傳統的“非媒介”庫蠓種類具有了傳播疫病的能力。由庫蠓傳播的蟲媒病如藍舌病、鹿流行性出血病、水泡性口炎、施馬倫貝格病等，在全球一些國家或地區的傳播和流行，造成了巨大的經濟損失，對畜牧業發展構成了嚴重威脅。

同時據相關文獻記載，全世界已知蠓科有125屬5360種。蠓科中的吸血蠓類是蠓科昆蟲中能叮刺人和畜等動物種類的總稱，是醫學昆蟲的重要類群之一，其種類在全世界已知有4屬1503種，4個屬包括庫蠓屬(Culicoides)、蠛蠓屬(Lasiohlea)、細蠓屬(Leptoconops)和澳蠓屬(Austroconops)。其中庫蠓屬是蠓科中最大的一個屬，也是四大吸血蠓屬中分布最廣、蠓種最多、與人畜關系最密切的一個屬，兼吸人和動物血液，傳播疾病，危害人體健康，對畜牧業發展影響極大。現知庫蠓有1247種，占世界已知蠓科的23.3％，占已知4個吸血蠓屬的83％。據群落多樣性分析結果表明，我國庫蠓優勢種由南向北漸趨突出，而多樣性指數則南方高于北方。在華南熱帶雨林地區發現的庫蠓種類有133種。

可見對吸血庫蠓的準確鑒定是控制蠓傳疾病的重要基礎，也是疾病預防控制的核心前提。但是由于吸血蠓體型微小，形態學鑒定比較復雜，同時多種種間存在許多具有相似特征的隱種(Cryptic species)組成的復合體(Complex)或種團(group)，僅有少部分經驗豐富的分類學專家才能有效的鑒定其種類。而且形態學鑒定的成敗還需通過制作完整的玻片標本來完成，標本制作過程步驟繁瑣，周期長，難度大。因此對于吸血庫蠓迫切需要一種新的方法，以彌補傳統分類方法的缺陷，提高分類的效率和準確度。其中，庫蠓屬中分布范圍最廣的是原野庫蠓(Culicoides homotomus)，分布于除西藏外的其他各省區，是刺叮家畜的主要吸血蠓種，成蟲多見于牛舍，嗜吸牛、豬、馬、狗、羊、驢、兔、山羊、綿羊及猴等動物血液，亦吸人血，孳生于多有機物之濕地、小水溝、稻田、河邊浮泥中。為我國南方廄舍中眾多的蠓種，應予重視。因此，建立一種針對原野庫蠓的新鑒別方法，快速準確鑒定和區分出原野庫蠓，將有助于潛在媒介的調查研究，以便弄清媒介庫蠓的分布數量動態、生活習性，并掌握其各期在各種條件下的活動規律，進行有效防制，為我國媒介傳播性疾病的控制提供理論依據。

分子分類技術是以遺傳物質DNA序列分析為依據來闡明物種間的差別從分子水平上快速而準確地鑒別物種，它是分子生物學、計算機科學與傳統分類學相結合的產物，作為一種嶄新的分類學技術極大彌補了傳統形態學鑒定的缺陷。其中，DNA條形碼技術(DNABarcoding)是通過對一個標準目的基因的DNA序列進行分析，從而快速、準確地進行物種鑒定的技術。近幾年來，DNA條形碼技術已被證明是一個行之有效的生物鑒定手段，不僅可對傳統鑒定方法作強有力的補充，而且因為其更客觀、準確，突破以往對經驗的過度依賴，能幫助鑒定物種、發現新種和隱種、重建物種和高級階元的演化關系等。