[發(fā)明專利]胃癌外泌體miRNA分子標記的應用及其試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810130608.4
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108048574A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設計）人: 王弢;渠香云;賈云莉;董肇楠;馬雪情
• 申請（專利權）人: 江蘇為真生物醫(yī)藥技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發(fā)明公開了胃癌外泌體miRNA分子標記的應用及其試劑盒，開發(fā)出基于PCR平臺miRNA的兩步法檢測試劑盒，本發(fā)明利用外泌體miRNA為胃癌診斷方面提供了一定的應用價值，為胃癌的診斷和預后提供有利的技術支持。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)學分子生物學技術領域，具體涉及胃癌外泌體miRNA分子標記的應用及其試劑盒。

背景技術

根據國際癌癥研究機構的統(tǒng)計數據，全球范圍內，胃癌發(fā)病率位于惡性腫瘤第5位、死亡率居第3位。在我國，胃癌發(fā)病率及死亡率均居惡性腫瘤前列。胃癌的病因迄今未闡明，但已認識到多種因素會影響，共同參與胃癌的發(fā)生。胃癌癌癥早期幾乎不會有癥狀，以消瘦為最多，次為胃區(qū)疼痛，食欲不振，嘔吐等，初診時患者多已屬晚期，五年生存率低于30％。但如果早期得到診治，五年生存率可望達到90％。早期檢出胃癌能明顯有助于提高存活率。然而，由于已經診斷為處于相同階段的胃癌根據患者的不同而顯示出了預后的差異，因此精確預測胃癌預后以及早期檢出胃癌是有效治療胃癌的最重要因素。臨床上，已經使用解剖觀察法(癌細胞侵入程度和轉移的淋巴結數目)以便預測胃癌患者的預后，但是該方法存在醫(yī)師主觀判斷的可能介入和精確預測預后的局限。根據傳統(tǒng)的治療方案，一部分早期患者可能能夠從術后輔助化療中獲益，而相反，有些低復發(fā)風險的進展期患者可能接受了原本不必要的輔助化療，并為此接受化療的毒性和風險帶來的生活質量下降。因此探尋胃癌診斷標志物對于胃癌的早期診斷，療效監(jiān)測，復發(fā)及預后判斷顯得尤為重要。

外泌體(Exosome)是一種直徑為30-150納米的囊泡狀結構，廣泛存在于血液、唾液、尿液、腦脊液等生物體液中。它形成于多種細胞，如樹突狀細胞、腫瘤細胞等的胞吐作用。外泌體的外膜為脂質雙層結構，其內包裹有特異的蛋白、信使RNA和非編碼RNA等。外泌體中的非編碼RNA以miRNA為主，且種類豐富，其可以影響干細胞分化、器官形成、造血作用、腫瘤發(fā)生以及新陳代謝等諸多生理活動。miRNA(microRNA)是廣泛存在于生物體內的19-25nt的非編碼單鏈小分子RNA，其通過與靶基因mRNA的互補配對降解靶mRNA或抑制其翻譯。研究表明miRNA在腫瘤發(fā)生過程中起重要作用，miRNA很有可能成為癌癥治療與診斷的新途徑。miRNA與靶基因mRNA的非編碼序列(3′-UTR或5′-UTR)存在著一對多的關系。在癌癥病例中經常發(fā)現miRNA群表達失調的現象，而這些miRNA表達的改變與癌癥發(fā)生密切相關。在體外實驗中，改變一個或者多個miRNA的表達能夠促進或者抑制癌細胞惡化，促進癌細胞惡化的miRNA可以認為是一類癌基因，反之，抑癌基因。外泌體中的miRNA能以穩(wěn)定的形式存在于人類的體液如血清、血漿中而不被降解，通過特定的分離純化手段能夠被檢測到，而且外泌體中生物活性物質可分析活細胞的動態(tài)變化，允許實時捕獲腫瘤異質性，這也使它有可能成為無創(chuàng)檢測篩查的新型重要標志物。

發(fā)明內容：

本發(fā)明結合外泌體(exosome)和miRNA的相關特點，對胃癌血清exo-miRNA、肺癌組織exo-miRNA表達圖譜的變化及與腫瘤的相關性進行評價，篩選出診斷和預示胃癌外泌體microRNA分子標志物：

本發(fā)明中，所述胃癌外泌體miRNA分子為miR-106a、miR-375、miR-148a或Let-7a中至少兩種。

進一步，所述標志物為miR-106a與miR-375聯合，miR-106a與miR-148a聯合或miR-106a與Let-7a聯合。

進一步，所述診斷和預示為胃癌篩查、輔助診斷、療效評價、預后評估或復發(fā)監(jiān)控。

本發(fā)明中，所述胃癌外泌體來源于體液或細胞。

本發(fā)明中，所述體液包括血液、痰液、胃液、胃部灌洗液、尿液或唾液中的至少一種。