[發明專利]胃癌外泌體miRNA分子標記的應用及其試劑盒

在審

• 申請號: 201810130608.4
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108048574A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 王弢;渠香云;賈云莉;董肇楠;馬雪情
• 申請（專利權）人: 江蘇為真生物醫藥技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.胃癌外泌體miRNA分子在制備診斷和預示胃癌標志物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述胃癌外泌體miRNA分子為miR-106a、miR-375、miR-148a或Let-7a中至少兩種。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述標志物為miR-106a與miR-375聯合，miR-106a與miR-148a聯合或miR-106a與Let-7a聯合。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述診斷和預示為胃癌篩查、輔助診斷、療效評價、預后評估或復發監控。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述胃癌外泌體來源于體液或細胞。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述體液包括血液、痰液、胃液、胃部灌洗液、尿液或唾液中的至少一種。

7.檢測權利要求1～6任一項所述胃癌外泌體相關microRNA分子的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒為基于PCR平臺miRNA兩步法檢測試劑盒。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒為基于PCR平臺miRNA兩步法檢測試劑盒，含microRNA分子標志物特異性莖環結構逆轉錄引物、PCR上游引物、PCR通用下游引物，用于檢測microRNA分子標記物的特異探針；

所述特異性莖環結構逆轉錄引物的頸部的loop環部設計非連續互補堿基對TGCG和CGCA構成鑰匙狀結構，逆轉錄反應時通過連接酶將短臂與microRNA分子相連接。

9.權利要求7中所述的檢測試劑盒，其特征在于：所述胃癌外泌體miRNA分子為miR-106a、miR-375、miR-148a或Let-7a中至少兩種，所述miR-106a逆轉錄引物序列如SEQ IDNO.1所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.2，通用下游引物序列如SEQ ID NO.3所示，特異探針核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述miR-375逆轉錄引物序列如SEQ ID NO.5所示，所述PCR上游引物序列如SEQ ID NO.6所示，通用下游引物序列如SEQ ID NO.3所示，特異探針核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述miR-148a逆轉錄引物序列如SEQ ID NO.8所示，所述PCR上游引物序列如SEQ ID NO.9所示，通用下游引物序列如SEQ ID NO.3所示，特異探針核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述Let-7a逆轉錄引物序列如SEQ ID NO.11所示，所述PCR上游引物序列如SEQ ID NO.12所示，通用下游引物序列如SEQ ID NO.3所示，特異探針序列如SEQ ID NO.13所示。

10.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，還包括胃癌外泌體miRNA標準品：miR-106a分子標志物標準品為miR-106a，稀釋后濃度為1011copy/μL，并梯度稀釋為系列標準品；miR-375分子標志物標準品為miR-375，稀釋后濃度為1011copy/μL；miR-148a分子標志物標準品為miR-148a，稀釋后濃度為1011copy/μL；Let-7a分子標志物標準品為Let-7a，稀釋后濃度為1011copy/μL。

11.一種基于miRNA雙通道檢測體系，其特征在于：包含分子標志物miR-106a、miR-375、miR-148a、let-7a；FAM及HEX標記的分子雜交探針；microRNA分子標志物特異性莖環結構逆轉錄引物、PCR上游引物、PCR通用下游引物。