[發(fā)明專利]用于檢測(cè)胡麻DNA的特異性引物和探針及實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810129952.1
• 申請(qǐng)日: 2018-02-08
• 公開（公告）號(hào): CN108103232A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉宇琴;徐紅;車團(tuán)結(jié);沈頌東;陳游;石文;張鐳;李亞鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州百源基因技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

1.用于檢測(cè)胡麻DNA的特異性引物和探針，其特征在于：所述探針序列為：5’-ATGACAATTTTGGACCCGACCTGGT-3’；

所述特異性引物為下述序列或?yàn)橄率鲂蛄械幕パa(bǔ)鏈序列：

上游引物序列為5’-CTCCCAATGTTTGCGTATCCTA-3’；

下游引物序列為5’-ATATCGACCCGAGTCAACCAAA-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性引物和探針，其特征在于：所述探針中5’端標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)為FAM、TET、JOE、HEX、VIC中的一種，3’端標(biāo)記的熒光淬滅基團(tuán)為TAMRA、DABCYL、BHQ中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特異性引物和探針，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物為向5’端和3’端方向延伸一至數(shù)個(gè)堿基或刪減一至數(shù)個(gè)堿基得到的序列。

4.一種用于檢測(cè)胡麻DNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒包括權(quán)利要求1所述的特異性引物和探針。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：在10μlPCR反應(yīng)體系中，所述上游引物的用量為0.1μl，所述下游引物的用量為0.1μl，所述探針的用量為0.2μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，其特征在于：所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒還包括系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性對(duì)照；所述標(biāo)準(zhǔn)品是將胡麻FAD3A基因與載體連接，轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞中誘導(dǎo)表達(dá)，提取重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒定量后稀釋，得到系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

7.權(quán)利要求1-3任一所述的特異性引物和探針、權(quán)利要求4-6任一所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒在如下任一中的應(yīng)用：

(1)定性或定量檢測(cè)或輔助檢測(cè)胡麻DNA；

(2)制備定性或定量檢測(cè)或輔助檢測(cè)胡麻DNA的產(chǎn)品；

(3)定性或定量檢測(cè)或輔助檢測(cè)植物油中是否含有胡麻油；

(4)制備定性或定量檢測(cè)或輔助檢測(cè)植物油中是否含有胡麻油的產(chǎn)品。

8.一種檢測(cè)或輔助檢測(cè)植物油中是否含有胡麻油的方法，其特征在于：分別以標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品DNA為模板，利用特異性引物和探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣品的Ct值判定結(jié)果；作為優(yōu)選，所述待測(cè)樣品DNA是使用冷凍干燥法提取的。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性2分鐘，94℃15秒、60℃40s并收集熒光信號(hào)，40個(gè)循環(huán)。