[發明專利]HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒及其制備方法

有效

• 申請號: 201810129704.7
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108283721B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 任建麗;周志益;趙紅雲;朱蕾蕾;王志剛;冉海濤;李攀;孫陽;郝蘭
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/61;A61K31/4745;A61K49/22;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 成艷

1.HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒，包括磷脂殼膜,其特征在于：磷脂殼膜上載有抗腫瘤藥物10-HCPT，磷脂殼膜上修飾有DC-膽固醇、兩側連有半胱氨酸的穿膜肽，磷脂殼膜外層吸附有透明質酸；兩側連有半胱氨酸的穿膜肽為CG-TAT-GC；

HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒由如下方法制備而成：

A.DSPE-CG-TAT-GC的合成，其操作步驟如下：

(1)DSPE-PEG-NHS的合成

(a)稱取磷脂-聚乙二醇-羧基溶于二氯甲烷，按1:3:2.5摩爾比加入N-羥基琥珀酰亞胺、二環己基碳二亞胺，在37.5℃攪拌反應12小時；

(b)反應完成后過濾，用無水乙醚進行洗滌后過濾，復溶后反向層析純化，真空干燥，得到DSPE-PEG-NHS；

(2)DSPE-CG-TAT-GC的合成

(a)分別將DSPE-PEG-NHS和兩側連有半胱氨酸的穿膜肽溶于二甲基亞砜，向兩側連有半胱氨酸的穿膜肽加入等摩爾比的三乙胺，20mM巰基乙醇；

(b)將CG-TAT-GC加入到DSPE-PEG-NHS中，攪拌反應2小時，加入三倍體積的水稀釋，調pH2～3終止反應；

(c)透析過夜，反向層析純化后，冷凍干燥得DSPE-CG-TAT-GC；

B.HA/CPPs-10-HCPT-NPs的制備，其操作步驟為：

(1)稱量：稱取10mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿，2mg DSPE-CG-TAT-GC，1.5mg DC-膽固醇，1mg抗腫瘤藥物10-HCPT原藥粉末；

(2)溶解：加入10ml甲醇和10ml三氯甲烷溶解；

(3)旋轉蒸發：使用旋轉蒸發器去除有機溶劑，旋轉蒸發時間為1h，得到藥脂薄膜；

(4)水化：加入4ml去離子水，將藥脂薄膜洗脫下來，得到藥脂混懸液；

(5)聲振：將藥脂混懸液預冷，然后緩慢加入120μl全氟正戊烷至藥脂混懸液中，使用聲振儀聲振乳化，得到乳白色液體；

(6)離心：將乳白色液體高速離心，離心轉速為8000rpm，溫度為4℃，時間為5min，離心完畢去棄上清液，用去離子水重懸沉淀，如此重復兩次，獲得CPPs-10-HCPT-NPs混懸液；

(7)配置透明質酸溶液：將6mg透明質酸鈉中加入10ml去離子水，溶解后配制成0.6mg/ml透明質酸溶液；

(8)靜電吸附：將CPPs/10-HCPT-NPs混懸液與0.6mg/ml透明質酸溶液等體積混合，靜置1h后，得到HA/CPPs-10-HCPT-NPs乳液。

2.根據權利要求1所述的HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒，其特征在于：所述的磷脂殼膜內部包裹有全氟戊烷。

3.根據權利要求2所述的HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒，其特征在于：其粒徑為(284.2±13.3)nm，粒徑多分散指數PDI為0.149。

4.根據權利要求3所述的HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒，其特征在于：其ZETA電位為-(16.55±1.50)mV。

5.根據權利要求4所述的HA介導CPPs修飾的載10-HCPT相變脂質納米粒，其特征在于：其載抗腫瘤藥物量為(5.23±0.34)，其全氟正戊烷包封率為(48.10±3.13)％。