[發(fā)明專(zhuān)利]一種雙重重金屬離子的可視化定量檢測(cè)新方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810129689.6
• 申請(qǐng)日: 2018-02-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108342456A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅云波;許文濤;黃昆侖;杜再慧;田晶晶
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6851
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6851;C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種金屬的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括體外核酸擴(kuò)增技術(shù),所述體外核酸擴(kuò)增技術(shù)的反應(yīng)體系包括下游引物、模板和至少兩種上游引物；所述至少兩種上游引物的各自的核苷酸序列中至少有一個(gè)核苷酸的堿基是不同的；所述至少兩種上游引物的每種上游引物包括：互補(bǔ)序列A、連接臂、互補(bǔ)序列B、可特異性擴(kuò)增所述模板的核苷酸序列和可與待測(cè)金屬結(jié)合的核苷酸；所述連接臂位于所述互補(bǔ)序列A和互補(bǔ)序列B之間，所述可特異性擴(kuò)增所述模板的核苷酸序列和可與待測(cè)金屬結(jié)合的核苷酸位于所述上游引物的5’端或3’端；所述互補(bǔ)序列A和所述互補(bǔ)序列B的核苷酸序列互補(bǔ)和/或反向互補(bǔ)；所述連接臂包括可抑制聚合酶結(jié)合的結(jié)構(gòu)和/或可抑制體外核酸擴(kuò)增過(guò)程中新鏈延伸的結(jié)構(gòu)；所述下游引物包括可特異性擴(kuò)增所述模板的核苷酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括下述1)-3)中的至少一種：

1)所述體外核酸擴(kuò)增技術(shù)包括超快速PCR反應(yīng)，所述超快速PCR反應(yīng)的反應(yīng)過(guò)程包括：90-98℃，2-6s；50-60℃，2-8s；共20-40個(gè)循環(huán)；

2)所述連接臂包括具長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)的化合物；

3)所述可與待測(cè)金屬結(jié)合的核苷酸具體包括含胸腺嘧啶或胞嘧啶的核苷酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1和/或2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括下述1)-8)中的至少一種：

1)所述至少兩種上游引物中的一種包括：將序列表中SEQ ID №：1和SEQ ID №：2所示的核苷酸序列通過(guò)連接臂連接后得到的引物；

2)所述至少兩種上游引物中的一種包括：將序列表中SEQ ID №：1和/或SEQ ID №：2所示核苷酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID№：1和/或SEQ ID №：2所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列通過(guò)連接臂連接后得到的引物；

3)所述至少兩種上游引物中的一種包括：將序列表中SEQ ID №：4和SEQ ID №：5所示的核苷酸序列通過(guò)連接臂連接后得到的引物；

4)所述至少兩種上游引物中的一種包括：將序列表中SEQ ID №：4和/或SEQ ID №：5所示核苷酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID№：4和/或SEQ ID №：5所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列通過(guò)連接臂連接后得到的引物；

5)所述下游引物包括序列表中SEQ ID №：3所示的核苷酸序列；

6)所述下游引物包括將序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

7)所述模板包括序列表中SEQ ID №：6所示的核苷酸序列；

8)所述模板包括將序列表中SEQ ID №：6所示核苷酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID №：6所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1、2和/或3所述的方法，其特征在于，所述方法還包括核酸自組裝顯色反應(yīng),所述核酸自組裝顯色反應(yīng)的反應(yīng)體系包括發(fā)卡序列，所述發(fā)卡序列包括發(fā)卡序列一和/或發(fā)卡序列二，所述發(fā)卡序列一包括：互補(bǔ)序列C、互補(bǔ)序列D和3個(gè)以上的任意核苷酸，所述3個(gè)以上的任意核苷酸位于所述發(fā)卡序列的5’端和/或3’端；所述發(fā)卡序列二包括互補(bǔ)序列E和互補(bǔ)序列F；所述互補(bǔ)序列D與互補(bǔ)序列F互補(bǔ)和/或反向互補(bǔ)；所述互補(bǔ)序列C與所述互補(bǔ)序列A和/或互補(bǔ)序列B互補(bǔ)和/或反向互補(bǔ)，所述互補(bǔ)序列C與所述互補(bǔ)序列E互補(bǔ)和/或反向互補(bǔ)。