[發明專利]一種電轉后PBMC的培養方法

在審

• 申請號: 201810129577.0
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN110129268A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 金華君;徐飛;劉韜;李林芳;錢其軍
• 申請（專利權）人: 上海細胞治療集團有限公司;上海細胞治療研究院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

1.一種培養電轉后的人外周血單個核細胞的方法，其特征在于，所述方法包括電轉人外周血單個核細胞后，先使用含人外周血單個核細胞培養液的上清液的復蘇液培養該電轉后的人外周血單個核細胞2-10小時、優選2-6小時的步驟。

2.一種人外周血單個核細胞的培養方法，其特征在于，所述方法包括使用含人外周血單個核細胞培養液的上清液的復蘇液培養該人外周血單個核細胞的步驟。

3.一種復蘇凍存的人外周血單個核細胞方法，其特征在于，所述方法包括使用含有人外周血單個核細胞培養液的上清液的復蘇液懸浮和培養解凍后的人外周血單個核細胞的步驟。

4.一種制備電轉的人外周血單個核細胞的方法，其特征在于，所述方法包括所述復蘇、電轉前的培養以及電轉后的培養的步驟；其中，所述復蘇包括使用含有人外周血單個核細胞培養液的上清液的復蘇液懸浮和培養解凍后的人外周血單個核細胞；所述電轉前的培養包括復蘇后使用含人外周血單個核細胞培養液的上清液的復蘇液培養該人外周血單個核細胞；所述電轉后的培養包括電轉后先使用含人外周血單個核細胞培養液的上清液的復蘇液培養該電轉后的人外周血單個核細胞2-10小時、優選2-6小時。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于，所述上清液如下制備：制備含人外周血單個核細胞和其培養基的細胞懸液并培養8-20小時、優選14-20小時，收集該培養液的上清，即為所述上清液；

優選地，所述細胞懸液中細胞濃度為1×10⁵-1×10⁸個細胞/mL，優選為1×10⁶-1×10⁷個細胞/mL，更優選為1×10⁶-4×10⁶個細胞/mL。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述含人外周血單個核細胞和其培養基的細胞懸液中的培養基為CTS^TM無血清細胞培養基。

7.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，所述復蘇液由所述上清液組成，或含有所述上清液和人外周血單個核細胞的培養基，或由所述上清液與人外周血單個核細胞的培養基組成；優選地，用于制備所述上清液的培養基與所述復蘇液中所含的人外周血單個核細胞培養基是相同的培養基；更優選地，用于制備所述上清液的培養基與所述復蘇液中所含的人外周血單個核細胞的培養基都是CTS^TM無血清細胞培養基。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，復蘇液中所述上清液與所述人外周血單個核細胞培養基的體積比為0.1：1-5：1；如1：2-2：1或1：1.5-1：3；

優選地，以體積百分比計，所述復蘇液中上清液的體積百分比為5-70％、優選10-40％、更優選30-40％，人外周血單個核細胞培養基的體積百分比為30-95％、優選60-80％、更優選60-70％；優選地，以體積百分比計，所述復蘇液含有30-70％的所述上清液和30-70％的所述人外周血單個核細胞培養基；更優選地，以體積百分比計，所述復蘇液含有30-40％的所述上清液和60-70％的所述人外周血單個核細胞培養基，或由30-40％的所述上清液和60-70％的所述人外周血單個核細胞培養基組成。

9.如權利要求1或4所述的方法，其特征在于，在使用所述復蘇液培養電轉的人外周血單個核細胞后，所述方法還包括將所培養的人外周血單個核細胞轉入人外周血單個核細胞培養基中進行培養的步驟；優選地，所述人外周血單個核細胞培養基為CTS^TM無血清細胞培養基。

10.如權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述解凍包括將容納所述凍存的人外周血單個核細胞的容器置于37℃的溫度下迅速解凍。