[發明專利]一種梭子蟹蛋白粉及其用途

在審

• 申請號: 201810129448.1
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108178779A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 葉常青;謝超
• 申請（專利權）人: 舟山海研食品科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/36;G01N33/68
• 代理公司: 北京華識知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 趙永強

本發明公開了一種梭子蟹蛋白粉，其制備方法包括：預處理、分離、提取、純化，首先將梭子蟹肉組織加入裂解液中研磨勻漿，離心后濃縮，加入丙酮脫脂，去除丙酮后加入PBS攪拌、離心，收集上清即得梭子蟹粗蛋白液，然后以梯度硫酸銨對梭子蟹粗蛋白液進行分段鹽析，經柱層析、透析和濃縮后即得梭子蟹蛋白粉。本發明還公開了梭子蟹蛋白粉用于診斷臨床梭子蟹螯過敏性疾病的應用。有益效果為：梭子蟹蛋白粉組分較完整，分子量跨度大，免疫活性強，與血清特異性免疫球蛋白結合更強，更適合應用于臨床診斷梭子蟹螯過敏性疾病，而且在梭子蟹蛋白粉的制備過程可大大降低蛋白質變性，使蛋白質濃縮液經超低溫冷凍后依然保存原有的蛋白活性。

技術領域

本發明涉及梭子蟹深加工領域，尤其是涉及一種梭子蟹蛋白粉及其用途。

技術背景

梭子蟹，有些地方俗稱“白蟹”。因頭胸甲呈梭子形，故名梭子。甲殼的中央有三個突起，所以又稱“三疣梭子蟹”，屬于節肢動物。雄性臍尖而光滑，螯長大，殼面帶青色；雌性臍圓有絨毛，殼面呈赭色，或有斑點。梭子蟹肉肥味美，有較高的營養價值和經濟價值，且適宜于海水暫養增肥。頭胸甲梭形，寬幾乎為長的2倍；頭胸甲表面覆蓋有細小的顆粒，具2條顆粒橫向隆堤及3個疣狀突起；額具2只銳齒；前側緣具9只銳齒，末齒長刺狀，向外突出。螯腳粗壯，長度較頭胸甲寬長；長節棱柱形，雄性長節較修長，前緣具4銳棘。研究顯示，存在于甲殼類動物中的過敏原有原肌球蛋白、球蛋白輕鏈、精氨酸激酶、肌鈣蛋白C等，不同種類的甲殼類動物過敏組分不同。此外，不同個體間對同一過敏食物的反應存在異質性，可能導致漏檢。因此，為提高臨床診斷梭子蟹螯蟹過敏原的靈敏度和特異度及脫敏治療的效果，需要制備組分全、免疫活性好的過敏原溶液，開發適合我國人群的過敏性疾病診斷試劑。

發明內容

本發明的目的在于提供一種梭子蟹蛋白粉及其用途，梭子蟹蛋白粉組分較完整，分子量跨度大，免疫活性強，與血清特異性免疫球蛋白結合更強，更適合應用于臨床診斷梭子蟹螯過敏性疾病，而且在梭子蟹蛋白粉的制備過程可大大降低蛋白質變性，使蛋白質濃縮液經超低溫冷凍后依然保存原有的蛋白活性。

本發明針對背景技術中提到的問題，采取的技術方案為：一種梭子蟹蛋白粉，其制備方法包括：預處理、分離、提取、純化，具體包括以下步驟：

預處理：在液氮環境中，將梭子蟹肉組織按料液比1：6-8加入裂解液中并研磨均勻，再用電動勻漿器勻漿30-60秒，0-4℃冰箱靜置1-2小時，于10000-13000r/min、0-4℃條件下離心60-90分鐘，收集上清，過濾后濃縮至30-35%分裝至-60～-80℃保存，備用；將梭子蟹肉組織加入裂解液中并充分研磨勻漿，可以將梭子蟹肉組織中的蛋白質與糖類、脂肪類初步分離，并將雜質剔除，為進一步的提取小黃魚蛋白質做好準備；

分離：將初步提取濃縮液解凍，按照體積比1∶12-15加入丙酮，置0-1℃冰箱脫脂24-48小時，期間換液1次，攪拌2-4小時，后濾去丙酮，干燥后稱重，每克樣品加15-17mlPBS，1-4℃靜置48-72小時，每12小時攪拌1-2小時，然后置于1-4℃、12000-15000r/min條件下離心20-30分鐘，收集上清即得梭子蟹粗蛋白液，置于-35～-40℃保存；通過丙酮脫脂，可大大降低粗蛋白液中的脂肪酸含量，同時以PBS溶解可除去濃縮液中的糖類，提高粗蛋白液中的蛋白質含量；

提取：依次用30%、50%、70%、90%飽和度的硫酸銨對梭子蟹粗蛋白液進行分段鹽析，具體方法為：在攪拌下緩慢加入硫酸銨，使其達到所需飽和度，再緩慢攪拌1-1.5小時，1-2℃靜置2-3小時，然后置于1-4℃、12000-15000r/min條件下離心20-30分鐘，收集沉淀溶于PBS，對梭子蟹粗蛋白液重復上述步驟，得到其余飽和度的硫酸銨沉淀組分；以不同梯度濃度的硫酸銨沉淀可以析出各飽和度狀態下的蛋白質，不僅可以防止蛋白質的流失，還可以大大提高蛋白質的得率與純度；