[發明專利]一種梭子蟹蛋白粉及其用途

在審

• 申請號: 201810129448.1
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108178779A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 葉常青;謝超
• 申請（專利權）人: 舟山海研食品科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/36;G01N33/68
• 代理公司: 北京華識知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 趙永強

1.一種梭子蟹蛋白粉，其制備方法包括：預處理、分離、提取、純化，其特征在于：所述預處理步驟為：在液氮環境中，將梭子蟹肉組織按料液比1:6-8加入裂解液中并研磨均勻，再用電動勻漿器勻漿30-60秒，0-4℃冰箱靜置1-2小時，于10000-13000r/min、0-4℃條件下離心60-90分鐘，收集上清，過濾后濃縮至30-35%分裝至-60～-80℃保存，備用。

2. 根據權利要求1所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述預處理步驟中，裂解液為7-8mol/L尿素、2-3mol/L硫脲、4-5%CHAPS、40-45mmol/L Tris、3-4mmol/L 4-乙基苯甲酸、0.3-0.5mmol/L L-赤蘚糖，余量為去離子水，使用前加入45-65mmol/L DTT。

3.根據權利要求1所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述分離步驟為：將初步提取濃縮液解凍，按照體積比1:12-15加入丙酮，置0-1℃冰箱脫脂24-48小時，期間換液1次，攪拌2-4小時，后濾去丙酮，干燥后稱重，每克樣品加15-17mlPBS，1-4℃靜置48-72小時，每12小時攪拌1-2小時，離心后收集上清即得梭子蟹粗蛋白液，置于-35～-40℃保存。

4.根據權利要求3所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述分離步驟中，離心的溫度為1-4℃，轉速為12000-15000r/min，離心時間為20-30分鐘。

5.根據權利要求1所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述提取步驟為：依次用30%、50%、70%、90%飽和度的硫酸銨對梭子蟹粗蛋白液進行分段鹽析，具體方法為：在攪拌下緩慢加入硫酸銨，使其達到所需飽和度，再緩慢攪拌1-1.5小時，1-2℃靜置2-3小時，離心后收集沉淀溶于PBS，對梭子蟹粗蛋白液重復上述步驟，得到其余飽和度的硫酸銨沉淀組分。

6.根據權利要求5所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述提取步驟中，離心的溫度為1-4℃，轉速為12000-15000r/min，離心時間為20-30分鐘。

7. 根據權利要求1所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述純化步驟為：纖維素預處理后裝柱，柱尺寸為1.0cm×40.0cm，以0.01-0.015mol/L Tris-HCl緩沖液充分平衡，將硫酸銨沉淀組分上樣，以2倍柱床體積的相同緩沖液洗柱，再用NaCl溶液＆Tris-HCl溶液梯度洗脫，調節流速為1.5-2.5mL/min，在210、280 nm下測定其紫外吸收，并收集各洗脫峰組分，用PBS充分透析和濃縮后即得梭子蟹蛋白粉，置于-35～-45℃保存。

8.根據權利要求9所述的一種梭子蟹蛋白粉，其特征在于：所述純化步驟中，洗脫液溶液NaCl溶液的濃度梯度為0.1-0.5mol/L，Tris-HCl溶液的濃度梯度為0.01-0.015mol/L。

9.一種梭子蟹蛋白粉的用途，其特征在于：所述梭子蟹蛋白粉可通過與血清特異性免疫球蛋白結合，用于診斷臨床梭子蟹螯過敏性疾病。