[發明專利]干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法

有效

• 申請號: 201810128855.0
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108362795B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 吳超超;胡志飛;高強;彭軍
• 申請（專利權）人: 杭州佰辰醫學檢驗所有限公司;杭州佰勤醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

本發明公開了一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法被適用于檢測干血片樣本內同型半胱氨酸的含量，以下步驟：獲取同型半胱氨酸定量標準矯正曲線；檢測樣品的制備；高通量液相色譜分離同型半胱氨酸；串聯質譜檢測所述同型半胱氨酸；以及獲取所述同型半胱氨酸的含量，所述方法具有檢測時間短，通量高，檢測靈敏度高，特異性強且前處理過程較簡單的優勢，對臨床上疾病的診斷和篩查具有重大意義。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法適用高通量液相色譜串聯質譜法快速高效地檢測干血片中同型半胱氨酸的含量。

背景技術

同型半胱氨酸(Hyperhomocysteinemia，Hcy)是一種含硫的非必需氨基酸，是蛋氨酸代謝循環中的重要中間產物，同型半胱氨酸Hcy的主要代謝去向如下：①釋放至細胞外液之中②在蛋氨酸合成酶的作用下，以N5-甲基四氫葉酸作為甲基供體，以維生素B12作為輔酶因子，最終生成四氫葉酸與蛋氨酸③和絲氨酸在胱硫醚β合成酶的參與作用下，縮合形成胱硫醚，然后進一步代謝形成胱氨酸。于是，在血液當中，總的同型半胱氨酸，簡稱為tHcy，包括游離的Hcy、Hcy與蛋白的蛋白結合物、Hcy-Hcy以及半胱氨酸-Hcy，其中約70％是以Hcy與蛋白的蛋白結合物的結合態形式存在，其中還原態的Hcy只占1-2％左右。

同型半胱氨酸Hcy參與的甲硫氨酸代謝循環對人體健康起著重大的影響作用，甲硫氨酸代謝循環的代謝紊亂會引起人體心血管疾病，輕度認知衰退，血管性癡呆和阿爾茨海默氏病等一系列疾病。流行病學統計中表明，高血壓等相關疾病患者多伴有體內不同程度的同型半胱氨酸Hcy水平升高的現象。并且，高同型半胱氨酸血癥是動脈粥樣硬化和冠心病的一個獨立危險影響因素，因此同型半胱氨酸Hcy的測定對心血管疾病預防和輔助診斷有重要意義。

正是同型半胱氨酸Hcy對人體而言十分重要，現有技術中存有很多種針對同型半胱氨酸Hcy的測定方法，包括高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜質譜聯用法、生化法、免疫法、液相色譜串聯質譜聯用(LC-MS/MS)法等，目前臨床檢測中最常用的有HPLC法、生化法和免疫法，但以上測定方法都各有各不可避免的缺陷。比如，以HPLC法為例，在利用HPLC技術檢測同型半胱氨酸Hcy含量時，需要先針對同型半胱氨酸Hcy進行樣品前處理，而針對同型半胱氨酸Hcy前處理需要進行衍生化步驟，衍生化生化步驟處理麻煩，不能適用于快速檢測同型半胱氨酸Hcy的含量。另外，生化法和免疫法的特異性不夠理想，并且存在試劑較昂貴的問題。

總而言之，現有臨床上尚未有得到被普遍認可的針對同型半胱氨酸Hcy的檢測方法。因此，開發一種新的能普遍應用于臨床上快速測定同型半胱氨酸Hcy含量的方法有著重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法應用高通量液相色譜串聯質譜法快速高效地檢測干血片中同型半胱氨酸的含量。

本發明的目的在于提供一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中應用所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法檢測同型半胱氨酸時，檢測樣品的前準備步驟簡單易操作并且可操作性高。

本發明的目的在于提供一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法不需要針對檢測樣品進行額外的衍生化處理步驟，從而簡便了同型半胱氨酸的檢測過程。

本發明的目的在于提供一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法可定性且定量地檢測同型半胱氨酸，同型半胱氨酸含量檢測準確度高。

本發明的目的在于提供一干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中應用所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方檢測時間短，檢測通量高，靈敏度高且特異性好。