[發明專利]干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法

有效

• 申請號: 201810128855.0
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108362795B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 吳超超;胡志飛;高強;彭軍
• 申請（專利權）人: 杭州佰辰醫學檢驗所有限公司;杭州佰勤醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

1.一種干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法被適用于檢測干血片樣本內同型半胱氨酸的含量，其特征在于，所述干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法包括以下步驟：

S1:獲取同型半胱氨酸定量標準矯正曲線：

其中所述同型半胱氨酸定量標準矯正曲線被實施為測試值和不同濃度的同型半胱氨酸與已知濃度的標記同型半胱氨酸的實際比值之間的關系，其中同型半胱氨酸定量標準校正曲線的線性范圍為0.36-199.79μmol/L，其中制備同型半胱氨酸定量標準矯正曲線中的各類反應條件同于實際檢測時的條件；

S2:檢測樣品的制備：

充分混合所述干血片樣本，內標液以及還原劑形成一第一反應液，靜置所述第一反應液，往所述第一反應液中添加萃取劑，得到一第二反應液，離心所述第二反應液，并獲取所述第二反應液的上清液，其中所述內標液被實施為已知濃度的標記同型半胱氨酸溶于甲醇形成的工作溶液，所述還原劑被實施為二硫蘇糖醇標準品用超純水稀釋形成的溶液；

S3:高通量液相色譜分離同型半胱氨酸：

利用超高壓液相色譜以及相應的流動相，在分析柱上從所述上清液中分離同型半胱氨酸，其中高通量液相色譜分離條件為：色譜柱為Primesep100，色譜柱柱溫：50℃；進樣量：10μL；流速：0.55 mL/min；流動相組成：A相為0.1%甲酸-水溶液，B相為0.1%甲酸-乙腈溶液；采用等度洗脫方式，其中所述等度洗脫方式的參數值為:流速：0.55 mL/min；A%為80；B%為20；

S4：串聯質譜檢測所述同型半胱氨酸：

通過串聯質譜針對性檢測同型半胱氨酸，獲取檢測值，其中質譜檢測條件為：電噴霧針電壓： 3.0 kV，去溶劑氣流速：800 L/h，去溶劑氣溫度：400 ℃，錐孔氣流速：50 L/h，檢測為正離子；以及

S5：獲取所述同型半胱氨酸的含量：

將所述檢測值代入所述同型半胱氨酸定量標準矯正曲線，計算得到該干血片中所述同型半胱氨酸的含量。

2.根據權利要求1所述的干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其特征在于，所述步驟S1進一步包括以下步驟：

S11:標準溶液的制備：

將同型半胱氨酸標準品用超純水稀釋到若干個不同濃度備用以獲取不同濃度的同型半胱氨酸溶液；

S12：血樣本的制備：

混合所述同型半胱氨酸溶液和全血溶液，并將制備得到的溶液風干為血樣本;

S13:標準樣品的制備：

充分混勻所述血樣本，內標液和還原劑，靜置反應后，加入萃取劑充分震蕩，離心后取標準上清液，其中所述內標液被實施為已知濃度的標記同型半胱氨酸溶于甲醇形成的工作溶液，所述還原劑被實施為二硫蘇糖醇標準品用超純水稀釋形成的溶液;

S14：高通量液相色譜分離同型半胱氨酸：

利用超高壓液相色譜以及相應的流動相，在分析柱上從所述標準上清液中分離同型半胱氨酸;以及

S15：串聯質譜檢測所述同型半胱氨酸：

通過串聯質譜針對性檢測同型半胱氨酸，獲取測試值；以及

根據所述測試值以及已知標準品和內標濃度值的比值獲取所述同型半胱氨酸定量標準矯正曲線。

3.根據要求2所述的干血片中同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其中所述步驟S2中檢測樣品的制備的反應條件一致于所述S13中標準樣品的制備的反應條件；所述步驟S3當中高通量液相色譜分離所述同型半胱氨酸的反應條件也一致于S14中高通量液相色譜分離所述同型半胱氨酸的反應條件；所述步驟S4當中串聯質譜檢測所述同型半胱氨酸的反應條件也一致于所述步驟S15中串聯質譜檢測所述同型半胱氨酸的反應條件。

4.根據權利要求1到3任一所述的干血片同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其特征在于，所述內標液與所述還原劑的體積比為2:1。

5.根據權利要求4所述的干血片同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其特征在于，所述萃取劑被實施為三氟乙酸和甲酸的乙腈溶液。

6.根據權利要求5所述的干血片同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其特征在于，所述標記同型半胱氨酸被實施為氘代同型半胱氨酸。

7.根據權利要求6所述的干血片同型半胱氨酸含量快速檢測方法，其特征在于，所述內標液的濃度為4 umol/L，所述還原劑的濃度為0.5 mol/L。