[發(fā)明專利]一種內(nèi)置生物套及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810128163.6
• 申請(qǐng)日: 2018-02-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108079375B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫繼煌;王海;曾昂;白明;張海林;王偉;李雪銀;劉文進(jìn);李衛(wèi)強(qiáng);石清東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京桀亞萊福生物技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種脫細(xì)胞異體真皮基質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述制備方法由如下步驟組成：

步驟一，將異體皮原料投入酶溶液中，浸泡振蕩處理，得半成品A；所述酶為磷脂酶和蛋白酶；其中，所述磷脂酶為磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D按照質(zhì)量比為1:1:1:1的混合物；所述蛋白酶為胰蛋白酶；

所述酶溶液pH值為7.0-8.0；

所述磷脂酶濃度為0.1g/L-0.4g/L；

所述蛋白酶的濃度為0.1g/L-0.3g/L；

步驟二，將半成品A取出，用生理鹽水浸泡，振蕩處理，得半成品B；

步驟三，將半成品B投入表面活性劑溶液中，超聲浸泡處理，得半成品C；所述表面活性劑溶液中含有0.1-0.3g/L的SDS，或所述表面活性劑溶液中含有0.1-0.3g/L的Triton X-100；

步驟四，將半成品C用生理鹽水浸泡，振蕩處理，得半成品D；

步驟五，將半成品D投入盛有DNA水解酶溶液的容器中，振蕩處理，得半成品E；

步驟六，將半成品E用生理鹽水浸泡，振蕩處理，得半成品F；

步驟七，將半成品F用注射用水清洗浸泡，得成品G；或者，進(jìn)一步地，還包括以下步驟：

步驟八，將成品G取出，包裝，滅菌，得成品H；或者將成品G取出，置于含有凍干保護(hù)劑的溶液中進(jìn)行冷凍干燥；包裝，滅菌，得成品H。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟一振蕩處理?xiàng)l件為振蕩0.5-4小時(shí)，振蕩轉(zhuǎn)速為10-200rpm，溫度為10-40℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟三所述超聲浸泡的條件為：40-80KHz，100-400W，溫度為1-20℃，超聲3-8分鐘，浸泡2-4小時(shí)，重復(fù)2-4次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟五中所述DNA水解酶溶液的濃度為4-8g/L，pH 7.0-8.0；和/或，

所述步驟五中振蕩處理?xiàng)l件為振蕩2-8小時(shí)，振蕩轉(zhuǎn)速為10-200rpm，溫度為10-40℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟五中所述DNA水解酶溶液的濃度為4-6g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟二、步驟四、步驟六、振蕩處理?xiàng)l件為振蕩1-2小時(shí)，振蕩轉(zhuǎn)速為80-150rpm，更換生理鹽水，繼續(xù)振蕩處理，重復(fù)該操作4-6次，溫度為1-5℃；和/或，

所述步驟七注射用水清洗浸泡條件為振蕩2小時(shí)，振蕩轉(zhuǎn)速為80-150rpm，溫度為1-5℃，更換注射用水，繼續(xù)振蕩處理，重復(fù)該操作4-6次。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟八所述凍干保護(hù)劑溶液由磷酸鹽緩沖液、透明質(zhì)酸和糖組成，其中透明質(zhì)酸的濃度為0.4-0.8mg/100mL，糖的濃度為10-20mg/100mL，所述糖為海藻糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、葡萄糖中的一種或幾種。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟八所述磷酸鹽緩沖液濃度為10mmol/L、pH為 7.0。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟八所述冷凍干燥包括：將成品G于5℃進(jìn)箱，保持1小時(shí)，降溫到-40℃并保持1小時(shí)，升溫到-18℃并保持1小時(shí)，再次降溫至-35℃保持1小時(shí)，啟動(dòng)真空泵，將干燥箱真空度抽到5-10Pa；用2小時(shí)將隔板升溫到-30℃，干燥箱真空度抽到1-5Pa，維持15h；用1小時(shí)將隔板升溫到0℃，并維持10h后，測(cè)定壓力升，直至壓力升小于1pa；用1小時(shí)將隔板升溫到10℃，并維持10h，測(cè)定壓力升，直至壓力升小于1pa；用0.5小時(shí)將隔板升溫到25℃，并維持8h，測(cè)定壓力升，直至壓力升小于1pa；整個(gè)干燥過(guò)程中前箱真空度不應(yīng)高于30Pa。

10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述方法制備的脫細(xì)胞異體真皮基質(zhì)。