[發(fā)明專利]缺失OPRT和LDH1基因的弓形蟲減毒活疫苗及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810127384.1 | 申請日： | 2018-02-08 |
| 公開（公告）號： | CN108379570B | 公開（公告）日： | 2020-08-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 申邦;周太芳;夏寧波;趙俊龍;周艷琴;方瑞;賀蘭;潘明;崔建敏;楊旭柯 | 申請（專利權(quán)）人： | 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | A61K39/002 | 分類號： | A61K39/002;A61P33/02;C12N1/11;C12N15/113;C12N15/90 |
| 代理公司： | 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104 | 代理人： | 徐紹新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 缺失 oprt ldh1 基因 弓形蟲 減毒活 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種預(yù)防弓形蟲感染的減毒活疫苗，其特征在于：含有同時缺失了乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因和乳酸脫氫酶1基因的弓形蟲疫苗蟲株，其中，乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，乳酸脫氫酶1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防弓形蟲感染的減毒活疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
1)出發(fā)弓形蟲蟲株具有乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因和乳酸脫氫酶1基因，所述乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述乳酸脫氫酶1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
2)通過同源重組的方法，經(jīng)過藥物篩選、PCR鑒定獲得的弓形蟲疫苗蟲株為缺失乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因和乳酸脫氫酶1基因，并且該疫苗蟲株切除了藥物篩選標(biāo)簽；
3)弓形蟲疫苗蟲株的體外培養(yǎng)；
4)以無血清的DMEM溶液或者PBS作為溶劑制成弓形蟲疫苗蟲株的速殖子混懸液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的預(yù)防弓形蟲感染的減毒活疫苗的制備方法，其特征在于：所述弓形蟲疫苗蟲株的體外培養(yǎng)需在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入尿嘧啶，與宿主細(xì)胞共同培養(yǎng)。
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