[發明專利]一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法

有效

• 申請號: 201810126741.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108344661B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 趙麗紅;馬秋剛;計成;張建云
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N5/04
• 分類號: G01N5/04;G01N30/02
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

本發明公開了黃曲霉毒素降解技術領域的一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法。該方法包括：飼料用仿生消化法進行消化；將降解黃曲霉毒素的微生物和相應的培養基加到上述消化后飼料中作為試驗組，并以未加微生物和培養基的作為對照組，于培養箱中進行降解培養；測定試驗組和對照組中黃曲霉毒素的含量；計算黃曲霉毒素的降解率。該方法符合動物實際的消化生理狀態，能真實反映微生物對飼料中黃曲霉毒素的降解效率，是一種切實可行的體外評價微生物降解飼料中黃曲霉毒素效率的方法，操作簡單、成本低、耗時短，可廣泛應用于食品、糧食及農副產品中黃曲霉毒素的降解效果的評價。

技術領域

本發明屬于黃曲霉毒素降解技術領域，具體涉及一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法。

背景技術

黃曲霉毒素是一種致癌、致畸、致突變的劇毒物質，黃曲霉菌侵染花生飼料而引起的花生黃曲霉毒素含量超標事件在世界各地均廣泛存在，在國際貿易中黃曲霉毒素含量是關鍵的衛生安全指標，而且這一指標越來越嚴格。開展黃曲霉毒素降解技術研究對于減少黃曲霉毒素污染、保障農產品質量與食物安全有重要意義。目前關于黃曲霉毒素去毒方法的研究有很多。理想的去毒方法是微生物降解法，該方法去毒效率高，毒素被破壞或轉化為無毒產物，價格低廉、易于實施，且不影響食品感官和理化品質。國內外研究者已報到多株降解黃曲霉毒素的微生物，但各菌株對毒素的降解效率高低有別，且大部分研究結果報道的是所篩選到的菌對黃曲霉毒素標準品的降級效果，而沒有關于菌對發霉飼料中黃曲霉毒素的降解效果和評價方法。

通過動物試驗進行體內評價成本高、耗時長。如何快速有效的體外評價微生物對飼料及原料中黃曲霉毒素的降解效果是目前生產實際所迫切需求的。

發明內容

本發明為了解決上述技術問題，提出一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法。具體技術方案如下：

一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法，包括如下步驟：

(1)飼料用仿生消化法進行消化，并測定其干物質消化率；

(2)將降解黃曲霉毒素的微生物和相應的培養基加到上述消化后飼料中作為試驗組，并以未加微生物和培養基的上述消化后飼料作為對照組，將試驗組和對照組置于培養箱中進行降解培養；

(3)培養結束后，測定試驗組和對照組中黃曲霉毒素的含量；

(4)計算黃曲霉毒素的降解率；

黃曲霉毒素的降解率＝[(對照組中黃曲霉毒素含量-試驗組中黃曲霉毒素含量)/對照組中黃曲霉毒素含量×100％]/干物質消化率。

上述方法還包括：在步驟(1)之前，設置不同的腸道外源酶混懸液用于仿生消化法，測定用不同腸道外源酶混懸液的仿生消化法消化后的飼料的干物質消化率，通過最高干物質消化率，確定仿生消化法中使用的最優腸道外源酶混懸液。

上述方法中，所述仿生消化法的具體步驟為：

a)口腔模擬：將飼料加入緩沖溶液中，混合均勻，調節pH到6.8，然后加入淀粉酶溶液，得到口腔模擬體系，37℃-39℃，150r/min消化1-3h；

b)胃模擬：消化結束后，向上述消化后的口腔模擬體系中加入HCl溶液，混合均勻，并調節pH至2.0，然后加入酸性外源酶混懸液，得到胃模擬體系，37℃-39℃，150r/min消化4-9h；

c)小腸模擬：向消化后的胃模擬體系中加入NaOH溶液，并調節pH至6.8，然后加入腸道外源酶混懸液，得到腸道模擬體系，37℃-39℃，150r/min消化16-20h。

上述仿生消化法中飼料、緩沖溶液、淀粉酶溶液、HCl溶液、酸性外源酶混懸液、NaOH溶液、腸道外源酶混懸液的加入量比值為：2g：20-30mL：1-1.5mL：8-12mL：1-1.5mL：3-7mL：2-3mL。