[發(fā)明專利]一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810126741.2
• 申請日: 2018-02-08
• 公開（公告）號: CN108344661B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙麗紅;馬秋剛;計成;張建云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N5/04
• 分類號: G01N5/04;G01N30/02
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種評價微生物降解飼料黃曲霉毒素效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）霉變飼料用仿生消化法進行消化，并測定其干物質(zhì)消化率；

（2）將降解黃曲霉毒素的微生物和相應(yīng)的培養(yǎng)基加到上述消化后飼料中作為試驗組，并以未加微生物和培養(yǎng)基的上述消化后飼料作為對照組，將試驗組和對照組置于培養(yǎng)箱中進行降解培養(yǎng)；

（3）培養(yǎng)結(jié)束后，測定試驗組和對照組中黃曲霉毒素的含量，計算黃曲霉毒素的降解率；

黃曲霉毒素的降解率=[（對照組中黃曲霉毒素含量-試驗組中黃曲霉毒素含量）/對照組中黃曲霉毒素含量×100%]/干物質(zhì)消化率；

所述方法還包括：在步驟（1）之前，設(shè)置不同的腸道外源酶混懸液用于仿生消化法，測定用不同腸道外源酶混懸液的仿生消化法消化后的飼料的干物質(zhì)消化率，通過最高干物質(zhì)消化率，確定仿生消化法中使用的最優(yōu)腸道外源酶混懸液；

所述仿生消化法的具體步驟為：

a）口腔模擬：將飼料加入緩沖溶液中，混合均勻，調(diào)節(jié)pH到6.8，然后加入淀粉酶溶液，得到口腔模擬體系，37℃-39℃，150r/min消化1-3h；

b）胃模擬：消化結(jié)束后，向上述消化后的口腔模擬體系中加入HCl溶液，混合均勻，并調(diào)節(jié)pH至2.0，然后加入酸性外源酶混懸液，得到胃模擬體系，37℃-39℃，150r/min消化4-9h；

c）小腸模擬：向消化后的胃模擬體系中加入NaOH溶液，并調(diào)節(jié)pH至6.8，然后加入腸道外源酶混懸液，得到腸道模擬體系，37℃-39℃，150r/min消化16-20h；

所述降解黃曲霉毒素的微生物為枯草芽孢桿菌，或由降解黃曲霉毒素的微生物生產(chǎn)制備的微生態(tài)制劑；

所述仿生消化法中飼料、緩沖溶液、淀粉酶溶液、HCl溶液、酸性外源酶混懸液、NaOH溶液、腸道外源酶混懸液的加入量比值為：2g：20-30mL：1-1.5mL：8-12mL：1-1.5mL：3-7mL：2-3mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖溶液為0.1 M、pH6.0的PBS緩沖溶液；所述HCl溶液為0.2 M的HCl溶液；所述NaOH溶液為0.6 M的NaOH溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述淀粉酶溶液濃度為4-10mg/mL；所述酸性外源酶混懸液濃度為10-25mg/mL；所述腸道外源酶混懸液包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果膠酶、纖維素酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶；其中，蛋白酶:淀粉酶:脂肪酶的質(zhì)量比=（1~4）:1:1，蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的總濃度為8-15mg/mL；蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的總質(zhì)量與果膠酶、纖維素酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶四者的總質(zhì)量之比為（5-15）:1。

4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述降解培養(yǎng)的條件為：37℃避光培養(yǎng)48h 。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述試驗組和對照組中黃曲霉毒素的含量采用免疫親和柱-高效液相色譜法測定。