[發明專利]檢測多種炎癥生物標志物的方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201810123907.5
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108459162A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 葉雷
• 申請（專利權）人: 深圳賽斯鵬芯生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 張全文

1.一種聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒，其特征在于，包括融血試劑、微球試劑和熒光試劑，

所述融血試劑中含有表面活性劑；

所述微球試劑包括直徑不同的N種微球，所述N種微球上分別對應偶聯N種炎癥生物標志物的第一單克隆抗體，且所述第一單克隆抗體上標記有生物素，其中，N的取值范圍為2～10的正整數；

所述熒光試劑包括所述N種炎癥生物標志物的第二單克隆抗體，所述第二單克隆抗體上標記有熒光素，且所述第一單克隆抗體、所述第二單克隆抗體與抗原的結合位點不同。

2.如權利要求1所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒，其特征在于，所述微球選自鏈霉素、羥基或氨基修飾的高分子微球，鏈霉素、羥基或氨基修飾的金屬微球中的一種。

3.如權利要求1所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒，其特征在于，所述N的取值范圍為2～5的正整數，且所述炎癥生物標志物選自C反應蛋白、降鈣素原、血清淀粉樣蛋白A、白介素、脂蛋白相關磷脂酶A2。

4.如權利要求1-3任一項所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒，其特征在于，所述融血試劑包括融血試劑濃縮液和融血試劑稀釋液，且所述融血試劑濃縮液和所述融血試劑稀釋液的體積比為(1:20)～(1:5)。

5.如權利要求4所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒，其特征在于，以所述融血試劑濃縮液的總重量為100％計，所述融血試劑濃縮液包括質量百分含量如下的下列組分：

6.如權利要求5所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑為十二烷基硫酸鈉，所述防腐劑為Proclin300。

7.一種聯合檢測多種炎癥生物標志物的方法，其特征在于，至少包括以下步驟：

提供全血樣本、血清樣本和如權利要求1-6任一項所述聯合檢測多種炎癥生物標志物的試劑盒；

在所述血清樣本中加入與所述N種炎癥生物標志物對應的N種商業抗原，配置成梯度濃度的工作標準溶液，獲取N種炎癥生物標志物的濃度-熒光強度標準曲線；

在所述全血樣本中加入融血試劑，進行融血孵育處理，得到融血樣本；在所述融血樣本中加入微球試劑和熒光試劑，經免疫反應獲得待測樣本；在與所述工作標準品相同的檢測條件下，采用懸浮陣列熒光免疫分析儀對所述待測樣本進行檢測，將檢測結果與所述濃度-熒光標準曲線進行比對，獲得N種炎癥生物標志物的濃度。

8.如權利要求7所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的方法，其特征在于，在所述融血樣本中加入微球試劑和熒光試劑，經免疫反應獲得待測樣本的步驟中，所述微球試劑和所述熒光試劑的體積比為1:1，所述免疫反應的條件為37℃條件下恒溫孵育2-15min。

9.如權利要求7所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的方法，其特征在于，在所述全血樣本中加入融血試劑，進行融血孵育處理的步驟，包括：采用所述融血試劑將所述全血樣本稀釋25-50倍，在37℃條件下恒溫孵育1-5min。

10.如權利要求7-9任一項所述的聯合檢測多種炎癥生物標志物的方法，其特征在于，在所述血清樣本中加入與所述N種炎癥生物標志物對應的N種商業抗原，配置成梯度濃度的工作標準溶液后，還包括；采用懸浮陣列熒光免疫分析儀對所述工作標準溶液進行檢測，獲取N種炎癥生物標志物的相對濃度-熒光標準曲線；采用人血清為基質的標準品對所述相對濃度-熒光標準曲線進行定標，分別獲得N種炎癥生物標志物的濃度-熒光標準曲線。