[發(fā)明專利]檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的方法及其試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810123907.5
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108459162A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉雷
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳賽斯鵬芯生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 張全文

1.一種聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，包括融血試劑、微球試劑和熒光試劑，

所述融血試劑中含有表面活性劑；

所述微球試劑包括直徑不同的N種微球，所述N種微球上分別對應(yīng)偶聯(lián)N種炎癥生物標(biāo)志物的第一單克隆抗體，且所述第一單克隆抗體上標(biāo)記有生物素，其中，N的取值范圍為2～10的正整數(shù)；

所述熒光試劑包括所述N種炎癥生物標(biāo)志物的第二單克隆抗體，所述第二單克隆抗體上標(biāo)記有熒光素，且所述第一單克隆抗體、所述第二單克隆抗體與抗原的結(jié)合位點不同。

2.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，所述微球選自鏈霉素、羥基或氨基修飾的高分子微球，鏈霉素、羥基或氨基修飾的金屬微球中的一種。

3.如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，所述N的取值范圍為2～5的正整數(shù)，且所述炎癥生物標(biāo)志物選自C反應(yīng)蛋白、降鈣素原、血清淀粉樣蛋白A、白介素、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2。

4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，所述融血試劑包括融血試劑濃縮液和融血試劑稀釋液，且所述融血試劑濃縮液和所述融血試劑稀釋液的體積比為(1:20)～(1:5)。

5.如權(quán)利要求4所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，以所述融血試劑濃縮液的總重量為100％計，所述融血試劑濃縮液包括質(zhì)量百分含量如下的下列組分：

6.如權(quán)利要求5所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑為十二烷基硫酸鈉，所述防腐劑為Proclin300。

7.一種聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的方法，其特征在于，至少包括以下步驟：

提供全血樣本、血清樣本和如權(quán)利要求1-6任一項所述聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的試劑盒；

在所述血清樣本中加入與所述N種炎癥生物標(biāo)志物對應(yīng)的N種商業(yè)抗原，配置成梯度濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液，獲取N種炎癥生物標(biāo)志物的濃度-熒光強度標(biāo)準(zhǔn)曲線；

在所述全血樣本中加入融血試劑，進行融血孵育處理，得到融血樣本；在所述融血樣本中加入微球試劑和熒光試劑，經(jīng)免疫反應(yīng)獲得待測樣本；在與所述工作標(biāo)準(zhǔn)品相同的檢測條件下，采用懸浮陣列熒光免疫分析儀對所述待測樣本進行檢測，將檢測結(jié)果與所述濃度-熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線進行比對，獲得N種炎癥生物標(biāo)志物的濃度。

8.如權(quán)利要求7所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的方法，其特征在于，在所述融血樣本中加入微球試劑和熒光試劑，經(jīng)免疫反應(yīng)獲得待測樣本的步驟中，所述微球試劑和所述熒光試劑的體積比為1:1，所述免疫反應(yīng)的條件為37℃條件下恒溫孵育2-15min。

9.如權(quán)利要求7所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的方法，其特征在于，在所述全血樣本中加入融血試劑，進行融血孵育處理的步驟，包括：采用所述融血試劑將所述全血樣本稀釋25-50倍，在37℃條件下恒溫孵育1-5min。

10.如權(quán)利要求7-9任一項所述的聯(lián)合檢測多種炎癥生物標(biāo)志物的方法，其特征在于，在所述血清樣本中加入與所述N種炎癥生物標(biāo)志物對應(yīng)的N種商業(yè)抗原，配置成梯度濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液后，還包括；采用懸浮陣列熒光免疫分析儀對所述工作標(biāo)準(zhǔn)溶液進行檢測，獲取N種炎癥生物標(biāo)志物的相對濃度-熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線；采用人血清為基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品對所述相對濃度-熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定標(biāo)，分別獲得N種炎癥生物標(biāo)志物的濃度-熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線。