[發明專利]檢測人類VDR、GC、LRP5、SLC30A8基因多態性的引物對、探針及試劑盒

在審

• 申請號: 201810123432.X
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108384844A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 吳宇亮;李科錚;李嬋;鐘宇萍;陳婷;遲海濱;楊勇
• 申請（專利權）人: 深圳鼎新融合科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6883
• 代理公司: 深圳市徽正知識產權代理有限公司 44405
• 代理人: 李想

本發明公開了一種檢測人類VDR、GC、LRP5、SLC30A8基因多態性的引物對、探針及試劑盒，尤其涉及利用多重不對稱熒光PCR探針熔解曲線法檢測上述基因多態性的引物對、探針及試劑盒，其用于分別擴增人類VDR、GC、LRP5、SLC30A8基因的上游引物和下游引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1?SEQ ID NO:8所示。本發明檢測試劑盒無需進行繁瑣的實驗操作，快速簡便，完全的閉管操作避免交叉污染，且試劑盒成本低廉，靈敏度高，特異性強，可以大規模推廣和應用。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及一種多重不對稱熒光PCR探針熔解曲線法檢測人類VDR、GC、LRP5、SLC30A8基因多態性的引物對、探針及檢測試劑盒。

背景技術

隨著人們的生活水平的提高，父母為了孩子的茁壯成長，往往盲目地給孩子補充各種“補品”，結果不但沒有達到任何預期效果，還可能使孩子體內營養素的比例失調，導致某些營養素過剩或缺乏，從而帶來負面的結果，如性早熟等。其實，要給孩子補充的應是因各種原因容易缺乏的營養素。這就需要父母從根源了解孩子會缺乏哪些營養元素，為什么會缺乏這類營養元素，因此針對營養元素的吸收利用的基因檢測在當前社會以及未來都將擁有廣泛的應用群體。本專利提出的人VDR、GC、LRP5、SLC30A8基因多態性檢測試劑盒(熒光PCR熔解曲線法)，對鈣、維生素D、鋅元素的吸收利用能力的基因進行檢測，能幫助父母了解孩子對鈣、維生素D、鋅元素的需求，進行合理補充，預防營養缺乏導致的各種疾病。

鈣元素是人體含量最多的礦物質，是骨骼和牙齒的重要組成元素，對心臟、肌肉和神經的正常功能也很重要。VDR基因的rs1544410位點多態性會影響人體的骨密度，該位點雜合型AG、突變型AA骨密度低風險較高，容易導致骨質疏松；近期發現的LRP5基因也是調控骨密度的重要基因之一，該基因的rs3736228位點與骨質疏松風險有關，其雜合型CT，突變型TT骨質疏松風險較高。有這兩類風險基因的人，建議補充鈣元素以避免骨質疏松的風險。

維生素D通過控制骨骼吸收和釋放鈣和磷來維持血液中鈣和磷的正常水平。GC基因編碼維生素D結合蛋白，控制維生素D在人體內的轉運過程，基因上的rs2282679位點調控人體血清中維生素D的濃度，其突變體雜合型AC，突變型CC能增加維生素D低循環水平的風險。

鋅是人類必需的微量礦物質，人體超過300種酶依賴于鋅。鋅對DNA和RNA合成，蛋白質代謝，酒精代謝，抗氧化和免疫功能以及維持體內酸堿平衡至關重要。SLC30A8基因編碼鋅轉運蛋白8(ZnT8)，主要在胰島β細胞中表達，在胰島素的分泌、合成及儲存過程中發揮著不可或缺的作用。該基因的rs13266634位點突變，雜合型CT，突變型CC會使鋅轉運蛋白活性變低，影響胰島素分泌，會增加肥胖和2型糖尿病風險。

目前，對基因突變、多態性的檢測分析技術主要包括：反向點雜交法(RDB)、基因芯片法、單鏈構象多態性分析(SSCP)、熒光定量PCR法、直接測序法、等位基因特異性PCR(AS-PCR)、高分辨熔解曲線(HRM)等。不同的方法各有其局限性，如RDB是一種異相的突變檢測方法，需要對PCR產物進行后續處理，操作步驟較多，容易引起污染，并且結果判讀易受主觀因素影響；基因芯片成本昂貴、難以普及；SSCP檢測率易受電泳條件(如pH值，離子強度和溫度等)的影響，其中溫度的影響最為敏感，需要嚴格控制電泳溫度；熒光定量PCR需熒光標記的特異性探針，一種探針只能進行一種基因突變類型的檢測，因此檢測試劑成本高，檢測突變種類少，操作相對復雜；HRM不能輕易使用多重模式同時進行幾個不同片段同時分型突變等等。因此，市場急需發展一種更為快速、經濟且高效的基因突變或多態性檢測技術。