[發明專利]口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法

在審

• 申請號: 201810123248.5
• 申請日: 2018-02-07
• 公開（公告）號: CN108114277A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 姜新鵬;高利;劉娣
• 申請（專利權）人: 姜新鵬
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61K9/52;A61K47/36;A61P31/14
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 賈澤純

口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法，它涉及微膠囊制備領域。本發明針對現階段國內防控豬流行性腹瀉病毒防控中口服滅活疫苗中的技術不足，基于滅活豬流行性腹瀉病毒和口服微膠囊制備技術，用于口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法。動物實驗結果表明，血清中和抗體效價檢測結果說明該微囊疫苗能誘導仔豬黏膜免疫和系統免疫應答，并產生了較高水平的血清和黏膜抗體，同時客觀說明了該微囊疫苗具有一定的緩釋效果。微囊疫苗抗原物質被仔豬口服后，能夠誘導仔豬特異性抗體IgG和IgA的表達，并增加了仔豬對PEDV的抵抗力，降低了仔豬死亡率，攻毒保護率高于對照組60?75％。

技術領域

本發涉及流行性腹瀉病毒的滅活技術及微膠囊制備技術等方法，具體涉及口服滅活豬流行性腹瀉病毒的微膠囊制備方法。

背景技術

感染豬流行性腹瀉病毒(PEDV)是導致豬病毒性腹瀉(PED)的主要原因之一，特征為嚴重的腸炎、嘔吐、水樣腹瀉和體重減輕等。該病一年四季均有發生，尤其在冬季嚴重，各種年齡階段的豬群均容易感染，但對仔豬的危害最大，病死率最高。嚴重的仔豬死亡率使得PEDV感染成為中國養豬業損失的一大因素。冠狀病毒的生命循環始于入侵現細胞。完成吸附后,病毒下一步需要進入宿主細胞的細胞漿質中。病毒可以插入細胞膜并發生病毒與幫細胞的膜融合,從而釋放病毒的基因組進入細胞漿引起仔豬小腸上皮細胞的病變。

新生仔豬出生后，被動免疫系統并沒有建立，主要依靠母源抗體抵抗病毒感染。由于1周齡內仔豬本身免疫系統尚未完全發育成熟,感染PEDV后免疫系統可呈現損傷,如淋巴濾泡內出現核濃縮、碎裂等病變,但腸系膜淋巴結和派伊爾氏結仍見有淋巴細胞增殖反應,腸粘膜固有層出現大量的淋巴細胞和漿細胞,而1月齡以上仔豬和成年豬都可見到明顯的局部粘膜免疫反應。另外，新生仔豬生產后的1-7天，且短時間是仔豬感染病毒發病主要時期，發病率可達78％，致死率可達100％。而肌肉注射并達到最佳抗體時間需要7天，切其體內含有母源抗體會干擾病毒粒子遞呈給免疫細胞，并不能發揮疫苗效果。然而黏膜免疫的激活并不受系統免疫和母源抗體干擾，3天即可以產生特異性IgA抗體效價頂峰，抗體有效中和感染的PEDV，發揮免疫保護作用。

研究發現,分泌型抗體lgA是保護豬體不受感染和免于發病的關鍵因素。slgA抗體可以從口腔途徑接種后在腸液和血清中檢出。而腸道外接種途徑接種豬則檢不出slgA。研究認為,病毒經口到腸道后,IgA免疫細胞在腸內經抗原致敏后轉移到乳腺定位,并將IgA抗體分泌到初乳和常乳內。很早就有提出,乳腺組織IgA是來源于腸道細胞分泌的。因此,使用滅活苗時由于抗原對腸表層下IgA漿膜細胞刺激很小,相應地乳內IgA就很少。口服、鼻腔或肌肉接種效果一般均較差，其主要原因是口服滅活病毒經胃酸和腸液消化降解，并不能有效發揮其免疫原型。經鼻腔噴鼻免疫，鼻腔的產生的黏膜免疫需要再經淋巴循環運送至腸粘膜表面，并不能在腸粘膜下淋巴系統產生免疫記憶細胞，仍不能產生足夠量的IgA。且肌肉注射主要激活系統性免疫，并不能主要激活黏膜免疫系統的漿細胞，產生黏膜抗體IgA。研究發現,IgA乳汁抗體不能被仔豬吸收,但在腸道內被動免疫中起重要作用。吮乳仔豬由于經常攝入含有PEDV中和抗體的初乳和常乳而獲得保護,這些抗體在腸腔內能中和感染的PEDV,從而保護易感染的小腸上皮細胞不受損傷。因此，如能把足夠量的病毒粒子有效地呈遞到仔豬小腸黏膜，不受胃酸和腸粘液的消化降解，抗原激活仔豬黏膜免疫系統，誘導產生足夠量的黏膜抗體Ig，對PEDV的疾病感染的預防和口服疫苗的研制提供新的思路。